PM2.5对人肺腺癌A549细胞iNOS合成的影响及其作用机制

• 作者: 唐萌 昂盛骏 熊丽林
• 来源期刊: 环境与职业医学
• 学科: 医学
• 关键词: 细颗粒物 人肺腺癌A549细胞 一氧化氮 一氧化氮合酶 核转录因子-κB p38 毒作用机制
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 433-437
• 分类号: R114|Q279
• 语种: 中文
• DOI: 10.13213/j.cnki.jeom.2016.16131

摘要

[目的]探讨大气细颗粒物(PM2.5)对人肺腺癌A549细胞合成一氧化氮(NO)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性的影响及其机制. [方法]采用空气总悬浮颗粒物采样器采集南京市大厂区空气中PM2.5,并制成0、12、25、50、100、200、400 μg/mL悬液,染毒A549细胞,采用MTT比色法测定细胞毒性;用硝酸还原酶法测NO;用一氧化氮合酶测定试剂盒测iNOS;用实时定量PCR法检测iNOS mRNA表达水平的改变;用蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测iNOS、核转录因子-κB(NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(p38-MAPK)蛋白表达水平,p65-NF-κB和p38-MAPK两条通路的抑制剂分别采用PDTC和SB203580. [结果]PM2.5与A549细胞存活率呈剂量-反应关系(r=-0.971,P＜0.05);NO和iNOS释放量均随剂量增加而升高(rNO=0.989,riNOS=0.950,均P＜0.05),染毒剂量为100 μg/mL时,NO释放量高达(97.40±11.11) μmol/L,是对照组的6.59倍;iNOS释放量为(16.16±0.75)U/mL,与对照组相比增加了约29％.经SB203580和PDTC两种抑制剂预处理后,iNOS释放量下降:抑制剂SB203580浓度为25 μmol/L时,iNOS释放量为(3.149±0.139)U/mL;抑制剂PDTC浓度为25 μmol/L时,iNOS释放量为(4.361±0.182)U/mL,约占对照组1/4;iNOSmRNA表达量下调,各染毒组与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).两种抑制剂均能抑制PM2.5诱导的A549细胞iNOS蛋白表达. [结论] PM2.5引起A549细胞存活率降低,具有剂量-反应关系,且剂量≥25 μg/mL的PM2.5可刺激A549细胞NO和iNOS的合成,PM2.5可能通过NF-κB和MAPK两条通路调控iNOS的合成.