Nrf2过表达与敲减Hep1-6稳转细胞株的建立

• 作者: 丰秀静 余文 周飞飞 张冬梅 杨南飞
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 核因子NF-E2相关因子2(Nrf2) Hep1-6细胞 Nrf2 过表达稳转株 Nrf2 敲减稳转株 Western blotting 定量PCR
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 遗传育种?生理生化
• 页码范围: 1251-1255
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3750字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2016.06.009

摘要

核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)是治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)的一个重要靶点分子。为了从体外研究小分子通过靶向Nrf2改善NAFLD的分子机制,首先PCR克隆鼠源Nrf2基因至pLenti6/V5-D-TOPO襅空载体得到重组载体pLenti6/V5-Nrf2,通过测序、酶切鉴定正确后,扩繁质粒,制备慢病毒并将其感染Hep1-6肝癌细胞,用稻瘟醇胚素筛选、鉴定获得稳定表达Nrf2的细胞株。同时,用Nrf2干扰质粒构建慢病毒感染Hep1-6肝癌细胞,通过嘌呤霉素筛选、鉴定Nrf2敲减的细胞株。 Q-PCR检测结果显示,过表达稳转株( pLenti6/V5-Nrf2)中Nrf2基因的表达量为对照组( pLenti6/V5-LacZ)的4倍,敲减稳转株中Nrf2基因的表达量大幅度降低。 Western blotting显示过表达稳转株的Nrf2表达量明显高于对照组,敲减稳转株的Nrf2表达量明显低于对照稳转株,此结果与Q-PCR结果一致。所克隆的Nrf2基因和敲减基因在Hep1-6小鼠肝癌细胞中得到了正确转录和翻译,稳转细胞株构建成功。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张冬梅	南京大学生命科学院医药生物技术国家重点实验室	22	106	6.0	9.0
2	余文	南京大学生命科学院医药生物技术国家重点实验室	6	74	4.0	6.0
3	周飞飞	南京大学生命科学院医药生物技术国家重点实验室	1	1	1.0	1.0
4	杨南飞	南京大学生命科学院医药生物技术国家重点实验室	1	1	1.0	1.0
5	丰秀静	南京大学生命科学院医药生物技术国家重点实验室	1	1	1.0	1.0