独行菜磷酸甲羟戊酸激酶LaPMK基因克隆、生物信息学分析及原核表达

• 作者: 冯卫生 杨方方 赵乐 郑晓珂 马利刚
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 独行菜 磷酸甲羟戊酸激酶 萜类合成 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2016,（17）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 3087-3093
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.17.021

摘要

目的 从独行菜Lepidium apetalum中克隆萜类合成途径关键酶磷酸甲羟戊酸激酶(phosphomevalonate kinase,PMK)基因,进行序列分析和原核表达.方法 根据独行菜转录组数据中LaPMK基因序列设计特异性引物,克隆得到LaPMK基因的开放阅读框(open reading flame,ORF),构建pET32a-LaPMK原核表达载体,在大肠杆菌BL21 (DE3)中用IPTG诱导表达LaPMK融合蛋白.结果 LaPMK基因ORF全长为l 518 bp (Genbank注册号KT004541),编码505个氨基酸.生物信息学分析结果显示LaPMK蛋白没有跨膜区,不含信号肽,位于细胞质中,含有GHMP激酶家族特异的N末端和C末端的保守结构域.系统进化树结果显示LaPMK蛋白与芜菁的PMK蛋白具有92％的序列相似性,亲缘关系较近.构建pET32a-LaPMK原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达LaPMK融合蛋白.结论 克隆了LaPMK基因,建立其稳定的原核表达体系,为LaPMK蛋白纯化、抗体的制备,进一步研究LaPMK基因在独行菜萜类合成途径中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	冯卫生	河南中医学院药学院	210	3004	32.0	45.0
3	郑晓珂	河南中医学院药学院	177	2007	27.0	38.0
5	赵乐	河南中医学院药学院	45	96	6.0	8.0
7	马利刚	河南中医学院药学院	34	65	5.0	6.0
17	杨方方	河南中医学院药学院	2	6	1.0	2.0