β-环糊精葡萄糖基转移酶基因的克隆、表达及酶学性质

• 作者: 吴华伟 李相前 谌恩华
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: β-环糊精葡萄糖基转移酶 坎皮纳斯类芽孢杆菌 克隆 大肠杆菌 酶学性质
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 77-81
• 页数: 5页
• 字数: 3805字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201611013

摘要

获取来自坎皮纳斯类芽孢杆菌(Paenibacillus campinasensis)的编码β-环糊精葡萄糖基转移酶(β-cyclodextrin glycosyltransferase,p-CGTase)的基因cgt,并将带有His-Tag去除信号肽的cgt基因克隆到表达载体pET28a(+)后,转入大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达.通过热变性和Ni-NTA获得重组β-CGTase纯化酶,再通过SDSPAGE检测,蛋白分子量在74 kDa左右,并初步研究了重组β-CGTase的酶学性质.结果表明:重组β-CGTase的酶促反应的最适pH为7.0,并且在pH为5.5～10.0范围稳定,最适反应温度为为65℃,重组酶在55℃保温5h时仍保持90％以上的活性.研究一些金属离子和化学试剂对重组酶的影响发现β-CGTase是一种金属酶,Ca2对酶的催化起关键作用,尤其是在低浓度下对酶的活性有促进作用.对重组酶的酶促反应动力学研究得出Km为3.75 mg/mL,vmax为0.33 mg/(min·mL).该研究成功实现了p-CGTase基因的异源表达,为进一步实现β-CGTase的工业化生产和应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李相前	淮阴工学院生命科学与化学工程学院	28	162	8.0	12.0
2	吴华伟	长江大学生命科学学院	16	54	4.0	6.0
3	谌恩华	长江大学生命科学学院	2	12	2.0	2.0