花生AhPLDα基因植物过表达载体构建及对拟南芥的遗传转化

• 作者: 刘义杰 宋亚辉 张朋娟 李玉荣 王瑾 程增书 郝军会 陈四龙
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 花生 AhPLDα基因 植物表达载体 转基因 干旱胁迫信号
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 页码范围: 31-38
• 页数: 8页
• 分类号: S332.4|Q78
• 字数: 6635字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2016.06.006

摘要

为了明确花生AhPLDα基因在响应干旱胁迫信号传导中的功能和作用机制,以ABA处理的冀花4号花生叶片cDNA为模板,用RT-PCR方法扩增AhPLDα1和AhPLDα2的全长CDS片段,采用酶切-连接的方法分别将这2个基因定向克隆到植物表达载体pBar-F3上,冻融法将重组子转入根癌农杆菌GV3101,利用改良Floral-dip法将过表达质粒转入拟南芥.菌落PCR和酶切结果表明,CaMV35S启动子驱动的过表达载体重组质粒pBar-AhPLDα构建正确.通过RT-PCR和qRT-PCR验证,表明AhPLDα1和AhPLDα2基因整合到拟南芥基因组中并能过量表达,获得了阳性转基因纯合株系.干旱胁迫试验表明,转基因植株的耐旱性较野生型明显增强.可见,AhPLDα基因参与了干旱胁迫应答过程,是转基因途径提高作物耐旱性的潜在候选基因.