shRNA沉默神经导向分子5A基因对A375细胞系增殖、转移和侵袭能力的影响

• 作者: 刘彤云 寸韡 张莉 李亚东 李凌佳 谢玉燕 陈晨
• 来源期刊: 中华皮肤科杂志
• 关键词: 黑色素瘤 Semaphorin 5A 慢病毒属 RNA,小分子干扰 肿瘤侵润
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 573-577
• 页数: 5页
• 字数: 4036字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2016.08.011

摘要

目的：探讨慢病毒介导短发夹RNA（shRNA）沉默神经导向分子5A（Semaphorin 5A）基因对恶性黑素瘤A375细胞系生物活性的影响。方法针对Semaphorin 5A设计2对shRNA引物及1对阴性对照引物，构建慢病毒载体，转染至人胚肾上皮HEK293T细胞系收获慢病毒，利用慢病毒感染A?375细胞系并通过嘌呤霉素筛选，成功获得稳定转染细胞系，实验分为实验组细胞（A375?shRNA1和A375?shRNA2）、阴性对照组细胞（A375?con）及空白对照组细胞（A375）。通过反转录PCR（RT?PCR）、Western印迹比较实验组细胞、阴性对照组细胞及空白对照组细胞Semaphorin 5A mRNA、蛋白表达水平的差异。噻唑蓝（MTT）检测细胞生长情况；侵袭试验及划痕试验比较转染前后细胞的侵袭运动能力。结果 Semaphorin 5A成功转染A375细胞后，经嘌呤霉素筛选，成功获得稳定转染实验组A375?shRNA2细胞系及对照组A375?con。反转录PCR及Western印迹检测，干扰后实验组A375?shRNA2较对照组A375?con、A375 Semaphorin 5A的转录水平及蛋白表达水平表达下调。MTT实验结果显示，A375?con与A375细胞生长差异无统计学意义（P>0.05），A375?shRNA2细胞生长明显减慢，与A375和A375?con比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。划痕实验结果显示，A375?shRNA2划痕处细胞无明显迁移，划痕未得到修复，而A375及A375?con划痕处细胞最终几乎将划痕覆盖。侵袭实验结果显示，A375组与A375?con组穿过的细胞数差异无统计学意义（P>0.05）；而A375?shRNA2通过小室的细胞明显少于A375及A375?con组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论慢病毒介导shRNA沉默Semaphorin 5A基因能使A375中的Semaphorin 5A有效下调，并抑制细胞的生长，降低细胞的侵袭以及运动能力。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈晨	中国医学科学院北京协和医学院 医学生物学研究所	10	7	2.0	2.0
2	李亚东	中国医学科学院北京协和医学院 医学生物学研究所	3	2	1.0	1.0
3	张莉	650000昆明医科大学第一附属医院皮肤科	1	0	0.0	0.0
4	李凌佳	650000昆明医科大学第一附属医院皮肤科	1	0	0.0	0.0
5	谢玉燕	650000昆明医科大学第一附属医院皮肤科	1	0	0.0	0.0
6	刘彤云	650000昆明医科大学第一附属医院皮肤科	1	0	0.0	0.0
7	寸韡	中国医学科学院北京协和医学院 医学生物学研究所	3	2	1.0	1.0