猪细小病毒 VP2的原核表达与多克隆抗体制备

• 作者: 张樑 张洪玲 王振宇 禹婷婷 童德文 赵志敏 黄勇
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 猪细小病毒 VP2 蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 47-52
• 页数: 6页
• 分类号: S852.655
• 字数: 4792字
• 语种: 中文

摘要

克隆猪细小病毒（PPV）VP2基因全长1740 bp，构建其原核表达载体后进行蛋白的表达与纯化，接种家兔制备多克隆抗体。用 PCR 方法扩增 PPV VP2全长基因，扩增产物克隆至表达载体 pET-32a并转化至 E．coli BL21（DE3）感受态中。分别用不同诱导时间、IPTG 浓度、温度诱导表达 VP2重组蛋白，经SDS-PAGE 电泳切胶回收纯化目的蛋白。对家兔进行3次免疫后，采集血清制备抗体。PCR 扩增得到1740 bp 的 VP2基因片段；构建原核表达载体 pET-32a-VP2，经37℃，IPTG 浓度1．0 mmol／L 诱导表达4 h可得分子质量大小约为82 ku 目的蛋白；间接 ELISA 检测抗体效价可达1∶12800；Western blot 证明所制备的抗体能够有效的应用于 PPV VP2抗原的检测。本研究成功构建了表达 PPV VP2基因的原核载体，获得了 VP2蛋白，制备了兔抗多克隆抗体，为建立检测 PPV VP2蛋白 ELISA 方法奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	童德文	西北农林科技大学动物医学院	91	938	15.0	27.0
2	禹婷婷	西北农林科技大学动物医学院	1	2	1.0	1.0
3	黄勇	西北农林科技大学动物医学院	14	67	5.0	7.0
4	张樑	西北农林科技大学动物医学院	7	91	4.0	7.0
5	张洪玲	西北农林科技大学动物医学院	1	2	1.0	1.0
6	王振宇	西北农林科技大学动物医学院	1	2	1.0	1.0
7	赵志敏	西北农林科技大学动物医学院	1	2	1.0	1.0