黄酒酵母ADH2、ALD2和ALD6基因敲除对黄酒中乙醛代谢的影响

• 作者: 刘华 吴宗文 吴殿辉 孙军勇 李童 谢广发 陆健
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: 黄酒酵母 基因敲除 ADH2 ALD2和ALD6 乙醛
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 字数: 4082字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201611001

摘要

以工业黄酒酵母N85尿嘧啶缺陷型单倍体2a-u3(MATa ura3)为出发菌株,研究分别敲除乙醛代谢相关酶的编码基因ADH2、ALD2和ALD6对乙醛代谢的影响.采用融合PCR技术分别构建乙醇脱氢酶编码基因ADH2敲除组件“ADH2S-URA3-ADH2X”和乙醛脱氢酶编码基因ALD2和ALD6敲除组件“ALD2S-URA3-ALD2X”和“ALD6S-URA3-ALD6X”,转化N85尿嘧啶缺陷型单倍体菌株后,以尿嘧啶缺陷型的恢复为筛选标记,分别获得ADH2、ALD2和ALD6基因缺失菌株2a-A2(△adh2)、2a-D2(△ald2)和2a-D6(△ald6).分别将获得的工程菌与亲本菌株以及前期构建的丙酮酸脱羧酶基因PDC5缺失菌株2a-P5(△pdc5)进行实验室规模的黄酒发酵实验.结果表明,与亲本菌株2a相比,工程菌2a-A2发酵液中乙醛含量降低了7.14％,而2a-P5发酵液中乙醛含量降低了32.68％,说明工业黄酒酵母乙醛的生成存在糖代谢途径,并且乙醛主要由丙酮酸脱羧而来;工程菌2a-D2和2a-D6发酵液中乙醛含量与亲本相比分别增加了144.91％和88.87％,说明乙醛脱氢酶是黄酒中控制乙醛降解的关键酶,而且ALD2基因在乙醛转化为乙酸过程中发挥更关键的作用.