布鲁菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白 DK63-887基因缺失株的构建及鉴定

• 作者: 张欢 张辉 李志强 李爽 李默 江雅丽 王震 郭飞 陈创夫
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 布鲁菌 DK63-887基因 缺失株 自噬相关基因
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 30-37
• 页数: 8页
• 分类号: S852.614
• 字数: 6270字
• 语种: 中文

摘要

为了构建羊布鲁菌16M（简称16M）的 DK63-887基因缺失株（16MΔDK63-887），探讨该基因与16M 介导自噬的关系。利用同源重组和抗性替换的方法，以卡那基因替换 DK63-887基因，获得突变株16MΔDK63-887。将亲本株16M、疫苗株 M5-90、突变株16MΔDK63-887在相同条件下振荡培养，观察其生长趋势变化；将各菌株置于不同外界环境中，观察其生存率；将各菌株侵染小鼠巨噬细胞，比较它们在宿主细胞内的生存能力及 RT-qPCR 检测自噬相关基因的表达。成功获得了布鲁菌 DK63-887基因缺失株且在20代内未发生回复性突变现象。与亲本株相比，16MΔDK63-887在体外培养生长趋势与亲本株相似，只是细菌的浓度存在一定差异；突变株在外界应激条件下生存能力低于亲本株；侵染4 h 后缺失株胞内细菌数量明显下降；RT-qPCR 检测到突变株的 ULKI、Beclin1表达量均显著降低（P ＜0．01），结果表明，布鲁菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白与16M 介导的细胞自噬密切相关，为16M 胞内寄生机制的研究奠定了基础。