植物位点特异性甲基化研究的引物设计及 PCR 体系优化

• 作者: 何蕾 刘宛 台培东 宋婕 崔伟娜 惠秀娟 成智博 曹霞 王鹤潼 贾春云
• 来源期刊: 农业环境科学学报
• 关键词: 植物甲基化 引物设计 Taq 酶 PCR 条件
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 污染生态
• 页码范围: 1686-1693
• 页数: 8页
• 分类号: Q943.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.11654/jaes.2016-0173

摘要

通过设计大量引物，探索在植物甲基化引物设计中长、短引物的设计方法及其相应的 PCR 条件，同时比较不同 Taq 酶对甲基化率影响。结果表明：17~30 bp 短引物适合使用 Touch-down 程序 PCR，但特异性差、成功率低；31~50 bp 长引物使用55℃退火60℃延伸的 PCR 条件成功率最高，其中反向引物的长度及 Tm 小于正向引物较佳；高保真酶因其3＇→5＇外切酶活性不宜用于甲基化研究，而 EpiTaqTM HS 在 PCR 结果中表现最佳。