FACSAria Ⅱ分选人肺腺癌A549细胞SP亚群的方法优化

• 作者: 尹荟菁 杨洁 田烨 符蓉 赵犇鹏
• 来源期刊: 上海交通大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 侧群细胞 细胞分选 肿瘤干细胞 分选纯度 分选活率
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1594-1598
• 页数: 5页
• 分类号: R329.2
• 字数: 4237字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8115.2016.11.010

摘要

目的·通过优化流式分选人肺癌A549细胞SP亚群方法,提高SP亚群分选纯度并缩短分选时间,以提高分选活率.方法·制备单细胞悬液,不同终浓度维拉帕米孵育及Hoechst33342标记染色,经PI标记检测SP细胞比例.选择最佳染色浓度,100 μm喷嘴,分选速度10 μL/min,用一次分选法(纯度模式)和二次分选法(富集+纯度模式)分选SP细胞和MP细胞,比较分选后纯度和分选用时.通过二次分选法获得SP细胞和MP细胞,分别行Lyso-Tracker Red/Hoechst 33342染色共聚焦观察和成瘤实验.结果·经二次分选法,SP细胞纯度达到99％以上,1×108个细胞分选时间＜5.2 h.共聚焦镜下观察到SP细胞大小与MP细胞无明显差异,MP细胞的溶酶体数量较SP细胞显著增多.Hoechst 33342均能染色,细胞活率不受影响.在小鼠成瘤实验中,SP细胞成瘤体积较MP细胞显著增大.结论·A549肺癌细胞Hoechst33342染色终质量浓度宜用6μg/mL;采用FACSAria Ⅱ对其SP细胞进行二次分选,不仅显著提高SP细胞分选纯度,还大大缩短分选时间,细胞活率不受影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨洁	上海交通大学基础医学院生物化学与分子细胞生物学系公共平台流式实验室	42	163	8.0	11.0
2	田烨	上海交通大学基础医学院生物化学与分子细胞生物学系公共平台流式实验室	6	7	1.0	2.0
3	赵犇鹏	上海交通大学基础医学院生物化学与分子细胞生物学系公共平台流式实验室	3	2	1.0	1.0
4	符蓉	上海交通大学基础医学院生物化学与分子细胞生物学系公共平台流式实验室	4	2	1.0	1.0