大黄素对脂多糖诱导的内皮细胞损伤Rho/ROCK信号通路的影响

• 作者: 周乐 姜月华 徐经新 李伟 胡洪贞 谭颖
• 来源期刊: 山东中医杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 大黄素 脂多糖 内皮细胞损伤 Rho/ROCK信号通路
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 146-149
• 页数: 4页
• 分类号: R285.5
• 语种: 中文

摘要

目的：探讨大黄素对脂多糖（LPS）诱导损伤的人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）骨架及通透性影响的作用机制。方法：HUECs分为五组：正常对照组、内皮炎症损伤模型组（0.2μg/mL LPS）、大黄素干预组（10μmol/L大黄素+0.2μg/mL LPS）、抑制剂对照组（0.2μg/mL LPS+50μmol/L Y27632）、西药对照组（10-5 mol/L缬沙坦+0.2μg/mL LPS）。首先，以内皮细胞生物学功能PCR基因芯片技术筛选可能的基因改变。结合基因芯片结果和文献中各基因功能，拟定观察Rho/ROCK通路相关的和可能涉及调节细胞骨架的基因，如纤连蛋白（FN）、整合素A5（ITGA5）、Ras同源基因家族成员（RhoA）、肌球蛋白轻链磷酸酶（MLCP）、磷脂酰肌醇-4，5-二磷酸肌醇3-激酶（PI3K）、黏着斑激酶（FAK）、血管内皮生长因子（VEGF）、血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）的mRNA表达水平，进行实时荧光定量PCR验证，同时以Western blotting对ITGA5、RhoA、4，5-二磷酸磷脂酰肌醇（PIP2）和磷酸化的肌球蛋白轻链（PMLC）进行蛋白水平的研究。结果：①LPS组Rho/ROCK通路相关基因（FN、ITGA5、RhoA、MLCP、PI3K、FAK、VEGF、VEGFR2）表达显著升高，ITGA5、RhoA、PIP2、PMLC的蛋白表达亦升高，与正常对照组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。②与LPS组比较，Y27632组、缬沙坦组的FN、ITGA5、RhoA、PI3K、FAK、VEGF、VEGFR2基因表达下降，MLCP表达上升，差异均有统计学意义（P＜0.05）；ITGA5、PIP2的蛋白表达下降；缬沙坦组PMLC表达降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。③与LPS组比较，大黄素组FN、PI3K、FAK表达降低，MLCP表达上升，差异均有统计学意义（P＜0.05）；PIP2蛋白表达下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：LPS可激活Rho/ROCK信号通路，成功构建HUVECs内皮损伤模型；Y27632和缬沙坦可阻断Rho/ROCK通路，对细胞骨架有较强的保护作用；大黄素可轻度抑制Rho/ROCK通路，同时可能通过调节PI3K、MLCP表达而影响其他通路（如AKT和/或FAK-PI3K信号通路）从而发挥对内皮细胞损伤的干预作用。