CD36基因新突变T538C（Trp180Arg）导致的CD36缺失和序列特异性引物PCR的基因分型技术的建立

• 作者: 何保仁 刘金莲 卢芳 吴国光 周燕 李丽兰 李恒聪 申卫东 蒋丽红 钟周琳 黎海燕
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 关键词: CD36缺失 基因突变 广西人群 血小板
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 619-624
• 页数: 6页
• 字数: 4861字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9406.2016.05.008

摘要

目的：对广西一位女性个体 CD36缺失的分子基础和特征及其基因分布进行研究。方法采用血小板抗原单克隆抗体特异性免疫固定试验(monoclonal antibody immobilization of platelet antigens assay,MAIPA)和流式细胞技术(flow cytometry,FCM)检测确定广西地区一位汉族女性个体的 CD36表型,应用CD36外显子测序、cDNA 克隆测序对其 CD36缺失发生的分子基础展开研究,构建表达CD36突变基因的细胞株[CD36(MT)细胞株]和表达CD36野生型基因的细胞株[CD36(WT)细胞株],应用 Western印迹检测细胞株 CD36蛋白表达情况。建立序列特异性引物聚合酶链反应(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)检测技术对所发现的突变基因进行进一步检测确认,在1010名随机无血缘关系的中国广西健康人中进行该CD36突变基因的多态性调查。结果本研究对象经 MAIPA 和FCM 表型检测结果为Ⅱ型 CD36缺失,CD36外显子测序发现其具有 T538C(Trp180Arg)突变杂合子,该突变点位于CD36第6外显子,克隆测序发现其CD36 cDNA 538位点 T 被 C 所替代,该突变可导致 CD36成熟蛋白氨基酸序列发生 Trp180Arg 改变。应用所建立的CD36 T538C PCR-SSP 检测结果显示 DNA 分型检测结果与测序结果完全一致；Western 印迹结果显示 CD36在CD36(MT)细胞株上不表达,而在CD36(WT)细胞株上有表达。对1010名中国广西人群进行CD36 T538C 的基因多态性调查发现该CD36538T和538C 等位基因频率分别为1.000和0.000,在本次调查人群中未发现具有538C 等位基因的个体。结论发现了一个CD36基因新突变 T538C(Trp180Arg)(GenBank：HM217022.1),并建立了鉴定该基因突变的PCR-SSP 的技术。该基因新突变是中国广西人群中一个罕见型,可导致Ⅱ型 CD36缺失的发生。本研究结果为了解中国地区人群 CD36缺失发生的分子基础和特征以及CD36基因新突变 T538C 的人群调查提供了实验基础。