TALENs 新型模块组装法及活性鉴定方法

• 作者: 张万明 张癸荣 池振奋 聂凌云 高敬 魏迪
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 转录激活样效应子核酸酶 模块组装法 线粒体 DNA HEK293F-T1
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 220-228
• 页数: 9页
• 字数: 3899字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.01.035

摘要

旨在提供一种新型的转录激活样效应子核酸酶（Transcription activator-like effector nucleases，TALENs）模块组装法（Unit assembly，UA）及活性鉴定方法。利用 TALE-NT 2.0在线工具在线粒体 DNA（Mitochondrial DNA，mtDNA）设计 TALENs 识别位点和剪切位点，借助 pEGFP-N1质粒将该段靶序列随机整合于 HEK293F 核基因组中，构建 HEK293F-T1细胞系，用于 TALENs 活性鉴定。依据转录激活样效应子（Transcription activator-like effectors，TALEs）自然单元模块序列，设计出一种新型的人工 TALEs 偏单元；根据 TALENs 识别位点，选取相应一单元模块，利用 UA 法组装；并设计出含有相应双酶切位点的 TALEs 串联模块序列和 TALENs 载体序列，定向连接后瞬时转染 HEK293F-T1细胞系。结果显示，新型模块组装法定向组装TALEs 模块，克隆效率高且瞬时转染后可看到清晰的套峰。结果表明，新型模块组装方法提高了 TALENs 构建过程中的克隆效率，并且不受末位0.5模块的 RVD（repeat-variable diresidue）限制，增加了靶序列设计的灵活性。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张癸荣		16	164	5.0	12.0
3	张万明		29	283	11.0	16.0
6	高敬		8	3	1.0	1.0
10	魏迪		3	25	2.0	3.0
14	池振奋	中国科学院北京基因组研究所	3	23	2.0	3.0