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摘要:
旨在提供一种新型的转录激活样效应子核酸酶(Transcription activator-like effector nucleases,TALENs)模块组装法(Unit assembly,UA)及活性鉴定方法。利用 TALE-NT 2.0在线工具在线粒体 DNA(Mitochondrial DNA,mtDNA)设计 TALENs 识别位点和剪切位点,借助 pEGFP-N1质粒将该段靶序列随机整合于 HEK293F 核基因组中,构建 HEK293F-T1细胞系,用于 TALENs 活性鉴定。依据转录激活样效应子(Transcription activator-like effectors,TALEs)自然单元模块序列,设计出一种新型的人工 TALEs 偏单元;根据 TALENs 识别位点,选取相应一单元模块,利用 UA 法组装;并设计出含有相应双酶切位点的 TALEs 串联模块序列和 TALENs 载体序列,定向连接后瞬时转染 HEK293F-T1细胞系。结果显示,新型模块组装法定向组装TALEs 模块,克隆效率高且瞬时转染后可看到清晰的套峰。结果表明,新型模块组装方法提高了 TALENs 构建过程中的克隆效率,并且不受末位0.5模块的 RVD(repeat-variable diresidue)限制,增加了靶序列设计的灵活性。
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内容分析
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文献信息
篇名 TALENs 新型模块组装法及活性鉴定方法
来源期刊 生物技术通报 学科
关键词 转录激活样效应子核酸酶 模块组装法 线粒体 DNA HEK293F-T1
年,卷(期) 2016,(1) 所属期刊栏目 研究报告
研究方向 页码范围 220-228
页数 9页 分类号
字数 3899字 语种 中文
DOI 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.01.035
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 张癸荣 16 164 5.0 12.0
3 张万明 29 283 11.0 16.0
6 高敬 8 3 1.0 1.0
10 魏迪 3 25 2.0 3.0
14 池振奋 中国科学院北京基因组研究所 3 23 2.0 3.0
传播情况
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研究主题发展历程
节点文献
转录激活样效应子核酸酶
模块组装法
线粒体 DNA
HEK293F-T1
研究起点
研究来源
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研究去脉
引文网络交叉学科
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生物技术通报
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1002-5464
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大16开
北京海淀区中关村南大街12号
18-92
1985
chi
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