猪瘟病毒C株特异的TCRVα5和Vβ6真核表达载体的构建及共转染研究

• 作者: 何小兵 冯园 房永祥 景志忠 曾爽 李守杰 王春燕 贾怀杰 陈国华
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒C株 TCR Vα/Vβ基因 脂质体转染 增强绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 34-40
• 页数: 7页
• 分类号: S852.651|Q789
• 字数: 5723字
• 语种: 中文

摘要

本实验室前期研究发现猪瘟病毒 C株特异的 TCR Vα5和 TCR Vβ6基因家族，为进一步研究其体外表达情况，应用 RT-PCR 从猪外周血单个核细胞中扩增其全长基因序列，并构建 TCR Vα5-pIRES2-EGFP 和 TCR Vβ6-pIRES2-EGFP 重组质粒，将其转染293T 细胞。结果显示，TCR Vα5和 TCR Vβ6全长基因分别为816 bp 和945 bp，双酶切和核酸序列测定证实 TCR Vα5-pIRES2-EGFP 和 TCR Vβ6-pIRES2-EGFP 重组质粒构建正确；转染293T 细胞24 h 后荧光显微镜下可以看到70％以上的细胞表达 EGFP 蛋白。此外，实时荧光定量 PCR 可检测到 TCR Vα5和 TCR Vβ6基因的表达，单独转染组和共同转染组Western blot 均可检测到 EGFP 蛋白的表达，且蛋白杂交带强度相似。研究结果表明，CSFV-C 株特异性的TCR Vα5-pIRES2-EGFP 和 TCR Vβ6-pIRES2-EGFP 真核表达质粒可同时转染到293T 细胞中，实现体外共表达。