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摘要:
根据已报道的葡萄病毒B(Grapevine virusB,GVB)核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR方法从葡萄中扩增获得GVB外壳蛋白基因(cp),大小为594 bp.通过序列测定和分析,选取优势分离物GVB-JFL cp基因克隆到原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达并纯化融合蛋白pET-GVB CP.SDS-PAGE电泳结果显示,融合蛋白获得过量表达,分子量约26 kD.以纯化蛋白为抗原免疫新西兰大耳白兔制备抗血清.采用间接ELISA和dot-ELISA对抗血清特异性进行检测,结果表明,抗血清可与感染GVB的西方烟和葡萄样品发生阳性反应,与健康植株及感染同属另一种病毒葡萄病毒A(Grapevine virusA,GVA)的样品不反应,阳性样品检测效价达1∶4 000,16个田间样品摩擦接种至烟草后有9个样品ELISA检测为阳性,表明制备的抗血清可用于GVB的特异性检测.
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文献信息
篇名 葡萄病毒B外壳蛋白原核表达及抗血清制备
来源期刊 园艺学报 学科 农学
关键词 葡萄病毒B 外壳蛋白 原核表达 抗血清
年,卷(期) 2016,(11) 所属期刊栏目 研究报告
研究方向 页码范围 2233-2242
页数 分类号 S661.1
字数 语种 中文
DOI 10.16420/j.issn.0513-353x.2016-0208
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研究主题发展历程
节点文献
葡萄病毒B
外壳蛋白
原核表达
抗血清
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园艺学报
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0513-353X
11-1924/S
大16开
北京中关村南大街12号
82-471
1962
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