葡萄病毒B外壳蛋白原核表达及抗血清制备

• 作者: 任芳 周俊 张尊平 李正男 胡国君 范旭东 董雅凤
• 来源期刊: 园艺学报
• 学科: 农学
• 关键词: 葡萄病毒B 外壳蛋白 原核表达 抗血清
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 2233-2242
• 分类号: S661.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16420/j.issn.0513-353x.2016-0208

摘要

根据已报道的葡萄病毒B(Grapevine virusB,GVB)核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR方法从葡萄中扩增获得GVB外壳蛋白基因(cp),大小为594 bp.通过序列测定和分析,选取优势分离物GVB-JFL cp基因克隆到原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达并纯化融合蛋白pET-GVB CP.SDS-PAGE电泳结果显示,融合蛋白获得过量表达,分子量约26 kD.以纯化蛋白为抗原免疫新西兰大耳白兔制备抗血清.采用间接ELISA和dot-ELISA对抗血清特异性进行检测,结果表明,抗血清可与感染GVB的西方烟和葡萄样品发生阳性反应,与健康植株及感染同属另一种病毒葡萄病毒A(Grapevine virusA,GVA)的样品不反应,阳性样品检测效价达1∶4 000,16个田间样品摩擦接种至烟草后有9个样品ELISA检测为阳性,表明制备的抗血清可用于GVB的特异性检测.