早、晚代MEF用于人胚胎干细胞培养的能力差异及分泌机制

• 作者: 全湛柔 刘玉生 周家宝 朱朱 李远全 王登川 石本艳 钟观清 黄春燕
• 来源期刊: 中国热带医学
• 学科: 医学
• 关键词: 胚胎干细胞 碱性成纤维细胞生长因子 小鼠胚胎成纤维细胞 细胞衰老 分泌
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 111-115
• 分类号: R329.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.13604/j.cnki.46-1064/r.2016.02.04

摘要

目的 比较早、晚代小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblasts,MEF)维持人胚胎干细胞(Human embryonic stem cells, hESCs)正常生长的能力差异,并从分泌因子角度探讨其机制,为开发基于晚代MEF的hESCs培养体系奠定基础.方法 以P3或P9代MEF为饲养层培养hESCs;通过添加碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF)调节MEF分泌因子表达;用β-半乳糖苷酶活性染色检测细胞衰老;用定量RT-PCR检测基因的mRNA表达水平;用ELISA检测TNF-a的分泌量.结果 P3代MEF增殖较快,能维持hESCs正常增殖,而P9代MEF呈现衰老表型,不能维持hESCs正常增殖.P9代MEF表达多种分泌因子(Grem1、Tgfb1、Inhba、Bmp4和Tgfb2)及衰老相关分泌表型(Senescence-associated secretory phenotype,SASP)因子(II-1a和Tnfa)的水平均明显高于P3代MEF.加入bFGF后,P3和P9代MEF的Grem1、Tgfb1和Inhba的表达均明显升高,而Bmp4和Tgfb2表达均下降.结论 P9代MEF保留对bFGF的反应性,但有明显衰老表型及SASP,SASP的出现可能是P9代MEF不能维持hESCs正常生长的重要原因.