金属离子协同氨基酸提高重组β-环糊精葡萄糖基转移酶在枯草芽孢杆菌中的表达

• 作者: 李兆丰 李才明 洪雁 石建中 程力 顾正彪 黄敏
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: 环糊精葡萄糖基转移酶 枯草芽孢杆菌 分泌表达 金属离子 氨基酸
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-8
• 页数: 8页
• 字数: 6721字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201607001

摘要

随着环糊精的应用越来越广,其生产所必需的环糊精葡萄糖基转移酶(EC2.4.1.19,简称CGT酶)已成为研究热点.为了克服天然菌种产环糊精葡萄糖基转移酶(CGT)能力低等缺陷,该文将来源于Bacillus circu-lans STB01的β-CGT酶基因插入质粒pST中,构建了分泌型表达载体cgt/ pST并在宿主B.subtilis WB600中成功表达;通过对摇瓶发酵产CGT酶的条件进行优化发现,当发酵培养基为TB,pH为7.0时,37℃培养48 h后胞外酶活力达到27.9 U/mL,与天然菌株B.circulans STB01在较优发酵条件下所分泌的胞外酶活力相比,提高了近19倍;对TB培养基碳源、氮源进一步优化,以6 g/L的玉米淀粉替代TB培养基中的甘油,以30 g/L的酵母提取物作为氮源,胞外酶活可达到31.2 U/mL;亮氨酸、天冬氨酸的添加能明显促进β-CGT酶的胞外表达,而0.5mmol/L Fe3+的添加能进一步将胞外酶活提高到36.9 U/mL.这是目前报道的β-CGT酶在B.subtilis中胞外表达的最高β-环化活力.