TaqMan－MGB 实时荧光定量 PCR 检测 RIG－G基因方法的建立及其方法学验证

• 作者: 吴军录 姚懿雯 庞丽 权文强 李冬
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 关键词: 实时聚合酶链反应 细胞内信号肽和蛋白质类 白血病,早幼粒细胞,急性
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 936-940
• 页数: 5页
• 字数: 4432字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2016.12.014

摘要

目的：建立一种以TaqMan－MGB荧光探针为特点，检测人类急性早幼粒细胞白血病（ M3型）中维甲酸诱导基因G（ RIG－G）的实时荧光定量聚合酶链反应（ RT－qPCR）方法，并运用该方法对正常人、M3患者外周血中的RIG－G表达水平进行分析，探讨其在M3诊断中的价值。方法方法学建立。针对人RIG－G基因设计特异性引物和TaqMan－MGB荧光探针，以逆转录的互补DNA为模板，建立TaqMan－MGB实时荧光定量PCR检测方法和标准曲线；在方法特异性、正确度、精密度、分析灵敏度、干扰物质等各方面对检测方法的性能进行评估，并用该法验证20例M3患者外周血与骨髓中RIG－G表达水平相关性，同时检测40份正常人及20份M3患者标本，t检验比较两组外周血RIG－G水平，用ROC曲线分析其对M3的检测效能。结果 RIG－G标准品拷贝数log值与循环阈值数（ Ct ）的标准曲线方程为：Y＝－3．539X＋42．952，R2＝0．999，呈良好的线性关系。用建立的实时荧光定量PCR方法检测标准品，结果与已知值比较，相关性系数r＝0．999，计算偏倚值均＜5％；分别选取高值（107拷贝／μl）、中值（104拷贝／μl）、低值（101拷贝／μl）3个浓度，批内CV分别为1．38％、2．31％、7．56％；批间CV分别为0．71％、1．17％、5．07％，均＜10％；该方法的分析灵敏度为101拷贝／μl。 M3患者外周血与骨髓中RIG－G表达水平相关系数为r＝0．996，斜率b＝0．973，结果相关性良好，t＝0．099，P＞0．05，显示两组标本检测结果差异无统计学意义。40份正常健康体检外周血RIG－G基因的拷贝数[3．62×104（1．61×104～4．90×104）拷贝／μl]与M3患者[7．10×102（5．43×102～2．21×103）拷贝／μl]差异有统计学意义（U＝18，P＜0．001）。结论成功建立了检测人外周血RIG－G基因的TaqMan－MGB荧光实时定量PCR方法。该法具有较好的正确度、精密度、灵敏度及特异性，能够为临床M3患者的早期诊断及治疗监测提供必要帮助。（中华检验医学杂志，2016，39：936－940）

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李冬	同济大学附属同济医院检验科	70	229	8.0	11.0
2	姚懿雯	同济大学附属同济医院检验科	17	32	3.0	4.0
3	吴军录	同济大学附属同济医院检验科	23	62	5.0	6.0
4	权文强	同济大学附属同济医院检验科	26	83	5.0	7.0
5	庞丽	同济大学附属同济医院检验科	2	10	2.0	2.0