慢病毒介导的GHSR1ashRNA对结直肠癌细胞生长的影响

• 作者: 刘岸 徐佳 黄成钢
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 结直肠癌 Ghrelin 生长激素促泌素受体1a PTEN
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: ? 论 著?
• 页码范围: 1227-1234
• 页数: 8页
• 分类号: R730.23
• 字数: 5903字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2016.07.012

摘要

目的：构建生长激素促泌素受体1a（ growth hormone secretagogue receptor 1a，GHSR1a）基因短发夹干扰RNA（ short hairpin RNA，shRNA）慢病毒载体，感染人结直肠癌细胞系SW480，观察沉默GHSR1a基因对SW480细胞生长的影响，并探讨其作用机制。方法：构建特异性靶向GHSR1a基因的shRNA慢病毒表达载体和阴性对照序列慢病毒载体；建立稳定表达GHSR1a shRNA的SW480细胞、阴性对照细胞（NC）及空白对照细胞（BC），RT－PCR检测GHSR1a的mRNA在细胞中的表达；通过Western blot技术检测细胞中GHSR1a、ghrelin、PTEN、p－AKT及p53蛋白的水平；CCK－8法测定GHSR1a shRNA对SW480细胞活力的影响；建立裸鼠结直肠癌皮下移植瘤模型，实验结束后处死裸鼠并测量各组裸鼠肿瘤重量；免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki－67和PTEN的阳性表达。结果：在体外实验中，GHSR1a在人结直肠癌细胞株Caco－2及SW480中的表达明显高于人正常结肠上皮细胞株NCM460的表达；成功建立了稳定表达GHSR1a shRNA的SW480细胞；GHSR1a shRNA能明显抑制SW480细胞GHSR1a mRNA及蛋白的表达；沉默GHSR1a基因后SW480细胞活力明显减弱；与NC组相比较，GHSR1a shRNA组细胞中PTEN mRNA及蛋白水平上调，AKT磷酸化被抑制，p53的表达明显增加；在体内实验中，与NC组相比较，GHSR1a shRNA组裸鼠结直肠癌皮下移植瘤重量明显减轻，同时Ki－67表达下调，PTEN表达上调。结论：慢病毒介导的GHSR1a shRNA对体内、外人结肠癌细胞的生长有明显抑制作用，该作用可能通过上调PTEN及其下游PI3K／AKT通路实现。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘岸	岳阳市第一人民医院胃肠外科	3	25	2.0	3.0
2	黄成钢	岳阳市第一人民医院胃肠外科	1	1	1.0	1.0
3	徐佳	岳阳市第一人民医院胃肠外科	2	8	1.0	2.0