黄曲霉寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因的克隆及其在工业酿酒酵母CICC1346中的表达

• 作者: 刘泽寰 吕晓静 康小龙 林蒋海 熊春江 肖文娟 黄清媚
• 来源期刊: 食品与发酵工业
• 关键词: 酿酒酵母 黄曲霉 重叠延伸PCR(splicing by overlap extension,SOE-PCR) 同源建模 寡聚-1,6-葡萄糖苷酶 淀粉
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 44-50
• 页数: 7页
• 字数: 4374字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.201608008

摘要

通过重叠延伸PCR(gene splicing by overlap extension,SOE-PCR)扩增黄曲霉寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因和酿酒酵母α-信号肽序列,定向重组到整合型表达载体pδRCMB中,并在CICC1346中实现分泌表达;然后通过同源建模、利用分子模拟软件Discovery Studio 4.1分析其蛋白结构,以对硝基苯-α-D-葡萄糖吡喃苷(pNPG)为底物,建立并确定酶活反应条件,并进行纯化、酶学性质分析;将密码子优化后序列在CICC1346中实现分泌表达,利用淀粉进行共发酵实验.结果显示:重组酶突变后相对野生型蛋白结构无影响.SDS-PAGE分析重组重组酶大小约为70 kDa;优化后最高酶活达到0.69 U/mL,重组酶最适pH为6.5,在pH4.5.0 ～ 7.0维持90％以上的酶活;最适温度为40℃,在30 ～ 40℃维持接近100％的酶活;受Cu2+和MR2+严格抑制;寡聚-1,6-葡萄糖苷酶与α-淀粉酶及糖化酶协同利用淀粉产乙醇,提高淀粉水解效率.这是首次报道黄曲霉的寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因在酿酒酵母整合型分泌表达.