改良低温螯合法分离家兔小肠绒毛和隐窝细胞及分离效果鉴定

• 作者: 刘丽慧 姚军虎 崔宏晓 张刚 徐秀容 李晶 沈雪梅
• 来源期刊: 动物营养学报
• 学科: 医学
• 关键词: 隐窝 绒毛 肠上皮细胞 螯合剂 家兔
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 实验方法
• 页码范围: 1442-1449
• 页数: 8页
• 分类号: R329
• 字数: 5455字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-267x.2016.05.020

摘要

本试验旨在研究家兔小肠绒毛和隐窝细胞的分离方法，为深入研究小肠上皮结构与功能提供体外模型。试验以新西兰白兔为试验材料，在不同螯合剂浓度[5、10、15、20、25 mmol／L乙二胺四乙酸（ EDTA）]和螯合温度（4、25℃）下分离小肠绒毛和隐窝细胞，检测所分离细胞团的产量、形态、细胞活率、完整性。结果表明：1）各螯合条件下分离的绒毛和隐窝细胞形态完整，基因组DNA与总RNA完整；2）螯合温度越高且EDTA浓度越大时，细胞富集率越高，但对细胞毒害作用也越强，4℃、5 mmol／L EDTA条件下绒毛和隐窝细胞富集率分别为7．75％和1．01％，绒毛相对完整率和隐窝细胞相对活率分别为91．67％和93．48％；25℃、25 mmol／L EDTA条件下绒毛和隐窝细胞富集率则分别高达17．89％和4．99％，但绒毛相对完整率和隐窝细胞相对活率仅为4．25％和5．17％；3）综合分析后确定，4℃、10 mmol／L EDTA条件下分离效果最佳；4）在最佳条件下所分离隐窝富集物的溶菌酶和α－防御素的相对表达量极显著高于绒毛富集物（P＜0．01），显示细胞纯度较高；且隐窝细胞经培养9 h后溶菌酶和α－防御素的相对表达量未发生显著变化（ P＞0．05），显示细胞依然具有较高活力。由此可见，改良的低温螯合法适用于家兔小肠绒毛和隐窝细胞的高效分离。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚军虎	西北农林科技大学动物科技学院	176	1102	16.0	21.0
2	李晶	西北农林科技大学动物科技学院	18	112	7.0	10.0
3	沈雪梅	西北农林科技大学动物科技学院	5	23	2.0	4.0
4	刘丽慧	西北农林科技大学动物科技学院	4	9	2.0	2.0
5	崔宏晓	西北农林科技大学动物科技学院	3	5	2.0	2.0
6	徐秀容	西北农林科技大学动物科技学院	22	187	8.0	13.0
7	张刚	西北农林科技大学动物科技学院	11	112	5.0	10.0