基于 DNA-launched 的猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作系统的建立

• 作者: 亓文宝 叶保国 张桂红 曹宗喜 焦培荣 谭树义
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 反向遗传操作系统 构建
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1-7,8
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 5791字
• 语种: 中文

摘要

为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）反向遗传操作系统，将 PRRSV 全基因组分6段克隆，构建获得6个重组质粒，先由 A1和 A2片段或 B1和 B2片段连接构成 A 片段或 B 片段，然后 D、C、B 和A 片段依次亚克隆入 pOKq 载体。在基因组5′端和3′端分别加上 CMV 启动子序列和 BGH 终止信号肽，全基因组510位核苷酸突变引入遗传标记位点 FseⅠ。测序正确的全基因组质粒命名为 pOK-A2BCD。再将pOK-A2BCD 质粒转染 BHK-21细胞，拯救病毒通过 PCR、酶切、测序和间接免疫荧光试验（IFA）鉴定，结果表明拯救病毒成功，为进一步研究 PRRSV 致病性等相关分子机制奠定了基础。