Rho激酶在氢气保护LPS诱导的Caco-2细胞上皮屏障功能障碍中的机制研究

• 作者: 于泳浩 于洋 张红涛 谢克亮 马小叶
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: rho相关激酶类 氢 脂多糖类 脓毒症 Caco-2细胞 肠上皮屏障功能
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 834-838
• 页数: 5页
• 分类号: R364.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/20160025

摘要

目的：探讨Rho激酶（ROCK）在氢气改善离体脓毒症肠屏障功能中的作用。方法常规培养人结肠上皮细胞Caco-2，分为6组（n=3）：对照组（C组）、富氢培养基组（H组）、脂多糖（LPS）处理组（L组）、富氢培养基+LPS组（HL组）、Rho激酶抑制剂Y-27632组（Y组）、Y-27632+LPS组（YL组）。H组给予0.6 mmol/L富氢培养基；LPS和Y-27632的处理浓度分别为50 mg/L、25μmol/L。建立Transwell小室模型，定期检测跨上皮电阻值（TEER值），当TEER值达到800Ω·cm2后给予处理，于6、12、24 h检测TEER值，24 h时检测FITC-右旋糖酐通过率。细胞接种于6孔板，融合达80%~90%后给予处理，实时聚合酶链式反应技术检测闭锁小带蛋白1（ZO-1）mRNA和ROCK mRNA表达情况；蛋白免疫印迹技术检测ZO-1蛋白和ROCK蛋白表达水平。结果与C组比较，H组12、24 h TEER值升高（P＜0.05），FITC-右旋糖酐通过率、ZO-1蛋白和ROCK蛋白表达水平差异无统计学意义；Y组6、12、24 h TEER值升高（P＜0.05），FITC-右旋糖酐通过率差异无统计学意义，ZO-1 mRNA表达增加，ROCK mRNA表达减少（均P＜0.05）；L组6、12、24 h TEER值降低，FITC-右旋糖酐通过率增高，ZO-1 mRNA和蛋白表达均下降，ROCK mRNA和蛋白表达均增加（P＜0.05）。与L组比较，6、12、24 h YL组TEER值增高，FITC-右旋糖酐通过率降低，ZO-1 mRNA表达增加，ROCK mRNA表达降低（均P＜0.05）。与L组比较，HL组6、12、24 h TEER值增高，FITC-右旋糖酐通过率降低，各时间点ZO-1蛋白表达上升，ROCK蛋白表达下降（均P＜0.05）。结论氢气可保护脓毒症肠屏障功能，改善肠上皮屏障完整性和通透性，增加肠细胞间紧密连接蛋白表达，这些保护机制可能与氢气抑制LPS诱导的ROCK过度表达有关。