铁皮石斛HDS基因的克隆与初步表达分析

• 作者: 吴林松 吴秋菊 林毅 樊洪泓 王翔 蔡永萍
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 铁皮石斛 4-羟基-3-甲基-2-E-丁烯基-1-焦磷酸合酶 基因克隆 表达分析
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 803-809
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.05.020

摘要

目的 从铁皮石斛Dendrobium officinale中克隆4-羟基-3-甲基-2-E-丁烯基-1-焦磷酸合成酶(4-hydroxy-3-methylbut-2-en-1-yl diphosphate synthase,HDS)基因,在大肠杆菌中诱导融合蛋白1,并探究该基因在铁皮石斛不同组织中的表达规律.方法 采用RT-PCR和RACE等方法获取铁皮石斛HDS (DoHDS)的cDNA全长,利用相关软件和在线网站进行生物信息学分析,使用Real-Time PCR分析DoHDS在不同组织的表达特征,构建原核表达载体pET-28a (+)-DoHDS,转化大肠杆菌BL21 (DE3)进行诱导表达.结果 成功获得DoHDS的cDNA全长序列,GenBank登录号为KJ161312,全长2666 bp,ORF为2238 bp,编码745个氨基酸.DoHDS在各组织中均有表达,在茎中表达量最高,为原球茎的5倍;SDS-PAGE结果显示诱导产物为1个相对分子质量(82700)与理论值相符的融合蛋白.结论 克隆了DoHDS的cDNA全长序列,探究其在不同组织中的表达模式,建立了原核表达体系,为后续研究DoHDS的功能提供了一定的理论基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡永萍	安徽农业大学生命科学学院	167	2775	29.0	45.0
2	林毅	安徽农业大学生命科学学院	139	2078	27.0	38.0
3	樊洪泓	安徽农业大学生命科学学院	42	540	13.0	22.0
4	王翔	安徽农业大学生命科学学院	12	44	4.0	6.0
5	吴秋菊	安徽农业大学生命科学学院	2	19	2.0	2.0
6	吴林松	安徽农业大学生命科学学院	1	10	1.0	1.0