猪核糖核酸酶L基因真核表达载体的构建与表达

• 作者: 丛晓燕 吴家强 周明明 姜宁朋 李俊 杜以军 王加才 王金宝 陈蕾
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 核糖核酸酶L 抗病毒 先天性免疫
• 年，卷（期）: 2016,（8）
• 所属期刊栏目: 兽医科技
• 页码范围: 69-72
• 页数: 4页
• 分类号: S852
• 字数: 3819字
• 语种: 中文

摘要

为了研究猪核糖核酸酶L(sRNase L)的抗病毒能力,利用pXJ41载体构建猪RNase L基因真核表达载体pXJ41-sRNase L,采用poly(I∶C)转染PK-15细胞刺激诱导sRNase L基因转录mRNA;根据GenBank上sRNase L基因编码区序列设计引物并加入真核表达增强序列Kozak序列,通过RT-PCR扩增sRNase L编码基因序列,并将其克隆至真核表达载体pXJ41,通过双酶切和测序鉴定重组质粒;将重组表达载体pXJ41-sRNase L转染Marc-145细胞,Western blot检测sRNase L在Marc-145细胞中表达.结果显示:成功扩增得到sRNase L基因全长;成功克隆至真核表达载体pXJ41并能够在Marc-145细胞中成功表达.结果表明:成功构建了真核表达载体pXJ41-sRNase L并在Marc-145细胞中实现了sRNase L的表达,为进一步研究sRNase L在猪体内先天性免疫中抗病毒能力及其机制提供了条件.