H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒二重RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 刘加波 奉彬 庞耀珊 张民秀 张艳芳 王盛 罗思思 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文 黄娇玲 黄莉
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: H9亚型禽流感病毒 禽肺病毒 二重反转录-聚合酶链反应 检测
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 7-12
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 5114字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank中H9亚型禽流感病毒HA基因和禽肺病毒F基因的保守序列，通过Blast进行比对，在各自保守的基因序列中分别设计了两对特异性扩增引物，引物扩增的片段大小分别为569 bp 和424 bp，应用这两对引物建立了 H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒的二重 RT-PCR 检测方法，对建立的方法进行了特异性试验、敏感性试验和临床样品验证。对检测为阳性的样品进行克隆和序列分析，以验证本方法的准确性。特异性试验结果表明，所有参试的 H9亚型禽流感病毒都能扩增出大小为569 bp 的片段，参试的禽肺病毒毒株扩增出424 bp 的片段，没有其他条带出现，而对照的参试毒株在569 bp 和424 bp 处没有任何条带；敏感性试验结果表明，本试验建立的方法能检测到10 pg 的 H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒 RNA 模板。应用本试验建立的方法对广西采集的病鸡样品132份进行检测，H9亚型禽流感病毒阳性的样品有6份，禽肺病毒阳性的样品2份；随机各挑取2份 H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒阳性 PCR 产物进行克隆和序列分析，经比对分析，2份 H9亚型禽流感病毒阳性 PCR 产物与 H9亚型禽流感病毒（No．JF715045．1）100％同源，2份禽肺病毒阳性 PCR 产物与禽肺病毒株（No．AF187154）100％同源。本试验建立的 H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒二重 RT-PCR 检测方法具有特异、敏感、快速的特点，可以用于临床快速准确检测 H9亚型禽流感病毒和禽肺病毒。