节瓜抗镰刀菌酸突变体内切几丁质酶基因的克隆与植物表达载体构建

• 作者: 何晓明 彭庆务 罗少波 谢大森 赵芹 陈俊秋
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 节瓜 抗镰刀菌酸突变体 内切几丁质酶基因 cDNA克隆 植物表达载体
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 生物技术与组织培养
• 页码范围: 539-547
• 页数: 9页
• 分类号: S642|Q78
• 字数: 5752字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2016.03.018

摘要

根据节瓜与枯萎病菌互作构建抑制消减文库获得的内切几丁质酶基因EST序列,以节瓜抗镰刀菌酸突变体“LT3”为试材,通过RT-PCR与RACE相结合的方法,获得了该基因全长cDNA序列,命名为CqChiⅠ.序列测定和生物信息学分析结果表明,该基因cDNA序列全长1139bp,编码区在38～982bp之间,编码314个氨基酸,蛋白质分子量为33.94ku,等电点为8.43,具有chitinase_gluco_hydro_19及lysozome_like superfamily功能域,推测该蛋白可能兼具几丁质酶与溶菌酶活性.结构分析表明,该蛋白二级结构中α螺旋、延伸链、β转角与无规则卷曲分别占24.20％、18.15％、7.96％和49.68％,该蛋白为亲水性非跨膜蛋白,1～23氨基酸预测为信号肽.其三级结构高度保守,为class Ⅰ碱性几丁质酶,属于几丁质酶第19家族,为分泌细胞外蛋白.序列比对与系统进化分析结果显示,CqChiⅠ与黄瓜、甜瓜、葫芦、苦瓜等植物几丁质酶基因亲缘关系紧密,与黄瓜碱性内切几丁质酶(XP004134833)相似性最高为85％.进一步构建了植物表达载体pCambia1300并转化农杆菌EHA105,通过蘸花法转化拟南芥,为后续开展基因功能研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谢大森	广东省农业科学院蔬菜研究所	100	798	15.0	23.0
2	何晓明	广东省农业科学院蔬菜研究所	95	933	16.0	26.0
3	彭庆务	广东省农业科学院蔬菜研究所	89	667	14.0	20.0
4	罗少波	广东省农业科学院蔬菜研究所	82	637	14.0	21.0
5	陈俊秋	广东省农业科学院蔬菜研究所	10	153	5.0	10.0
6	赵芹	广东省农业科学院蔬菜研究所	26	93	6.0	7.0