重组人βNGF 在大肠杆菌中的可溶表达、纯化及活性鉴定

• 作者: 王明灶 白羊 章永垒 葛平辉 邹有土 阮卡 陈星 陈胜亮 马燕玲 黄奋飞
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 人神经生长因子 大肠杆菌 可溶表达 生物学活性
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 202-207
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.11.023

摘要

旨在大肠杆菌中可溶表达重组人神经生长因子（Recombinant human β nerve growth factor，rhβNGF），并对表达产物进行分离纯化和生物学活性鉴定。成功扩增 hNGF β亚基基因，将其克隆入 pMAL-c2X 表达载体，构建了 hβNGF-MBP 的大肠杆菌表达体系并进行诱导表达，表达产物经纯化后以 Factor Xa 酶切去除麦牙糖结合蛋白（MBP），Western blot 鉴定后以 TF-1细胞法检测生物学活性。结果显示，pMAL-c2X-hβNGF 经酶切和测序证实构建正确，25℃、180 r/min、0.5 mmol/L IPTG 诱导下可溶表达hβNGF-MBP 融合蛋白。hβNGF-MBP 经 Factor Xa 酶切后可去除 MBP 标签，SDS-PAGE 分析纯化的 hβNGF 位于13 kD 左右，纯度可达95%。Western blot 鉴定为 hβNGF，结果表明，比活约为1×106 U/mg。在大肠杆菌中成功可溶表达 hβNGF，并具有较高的生物学活性。