采用微阵列数字PCR检测JAK2基因V617F突变

• 作者: 任惠民 关明 唐宜桂 张心菊 张群峰 杨瑞 樊妮 许笑 陈波斌
• 来源期刊: 中华检验医学杂志
• 关键词: 聚合酶链反应 微芯片分析技术 DNA突变分析 骨髓肿瘤
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 176-180
• 页数: 5页
• 字数: 4082字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2016.03.007

摘要

目的：采用数字PCR检测骨髓增殖性肿瘤相关的JAK2基因 V617F突变，评估该法的灵敏度、重复性和准确性。方法方法学评价。自2014－2015年间复旦大学附属华山医院收治的患者中，选取已知JAK2基因V617F突变的18例真性红细胞增多症病例、11例原发性血小板增多症病例、2例特发性骨髓纤维化病例及未知突变的6例红细胞异常增高病例和10名健康对照者。分别以HEL细胞株DNA和SW480细胞株DNA为突变型对照和野生型对照，稀释突变标准品为30％、10％、1％、0.1％和0.01％以验证微阵列数字PCR体系的灵敏度。使用两例低突变负荷样本（1％和10％），各重复5次，验证数字PCR体系重复性。以MGB探针法荧光定量PCR作为对照参考方法，检测微阵列数字PCR的检测性能。结果实验结果表明两种检测方法相关性高（ R2＝0.9983），而微阵列数字PCR能够检测最低约0.1％的微量突变，相应的突变拷贝数绝对定量为0.16拷贝／μl。突变负荷为1％和10％的样本重复性检测结果CV分别为17.29％和7.50％。此外，MGB探针法和数字PCR法均成功地从31例已知突变的病例样本中均检出JAK2基因 V617F突变阳性，而10名健康对照者都为阴性，两种方法得到的结果是一致的。从6例红细胞异常增高的病例中， MGB法未检出突变，而数字PCR成功检出2例微量突变样本，其突变率分别为0.37％和0.18％。结论微阵列数字PCR在JAK2基因V617F突变检测体系中表现出比荧光定量PCR的更高的灵敏度以及良好的稳定性，有助于其在体细胞突变微量情况下更准确地检出突变，避免漏诊误诊。（中华检验医学杂志，2016，39：176-180）

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	关明	复旦大学附属华山医院中心实验室	105	460	10.0	15.0
2	陈波斌	复旦大学附属华山医院血液科	54	189	8.0	10.0
3	任惠民	复旦大学附属华山医院中心实验室	116	768	14.0	21.0
4	张心菊	复旦大学附属华山医院中心实验室	21	145	7.0	11.0
5	杨瑞		6	5	1.0	2.0
6	樊妮	复旦大学附属华山医院血液科	7	27	3.0	5.0
7	许笑	复旦大学附属华山医院中心实验室	6	19	3.0	4.0
8	张群峰	上海市第五人民医院检验科	2	4	1.0	2.0
9	唐宜桂	复旦大学附属华山医院检验科	1	4	1.0	1.0