基于 SYBR Green 检测小麦黄花叶病毒的两步法 qPCR

• 作者: 佐久间俊 刘建军 刘成 刘爱峰 宋健民 宫文萍 小松田隆夫 曹新有 李豪圣 铃木孝子 韩冉
• 来源期刊: 山东农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 小麦黄花叶病毒 两步法 qPCR 酶联免疫吸附剂测定法
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 加工贮藏?分析检测
• 页码范围: 118-124,132
• 页数: 8页
• 分类号: S435.121.4+9
• 字数: 5333字
• 语种: 中文
• DOI: 10.14083/j.issn.1001-4942.2016.07.027

摘要

小麦黄花叶病毒病是其常发病，常造成严重减产。为建立可用于定量检测小麦黄花叶病毒（WYMV）拷贝数的 qPCR 方法，本研究对不同来源的 WYMV 小种序列进行比对分析，在序列保守区域设计引物11对，对其退火温度进行优化，进而建立各引物的 qPCR 标准曲线。结果发现，11对引物的扩增效率在50．60％～116．04％之间，仅2对引物可用于后续研究，扩增效率分别为97．21％（WY －05和 WY －06）和91．85％（WY －F2和 WY －R2）。利用其中的WY －F2和 WY －R2对高抗和高感 WYMV 的小麦品种进行分析，结果显示，抗感小麦品种 WYMV 拷贝数差异极显著。对抗感分离群体266个单株进行分析，发现该 qPCR方法灵敏度显著高于酶联免疫吸附剂测定法，更适用于抗感杂交分离群体的表型鉴定，因而可以用于抗WYMV 基因的遗传定位与图位克隆工作。