环介导等温扩增联合横向流动试纸条可视化检测哈维氏弧菌的研究

• 作者: 周前进 柴方超 程蝶 蔡怡 陈炯
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 哈维氏弧菌 溶血素基因 环介导等温扩增技术 横向流动试纸条 检测
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 60-68
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.06.010

摘要

以哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）为材料，利用环介导等温扩增技术（LAMP）进行核酸扩增，借助横向流动试纸条（LFD）完成产物检测，旨在建立一种可用于哈维氏弧菌快速检测的LAMP-LFD新技术。以哈维氏弧菌的溶血素基因（vhhA）为检测靶标设计了3对特异性引物（其中，上游内引物vhhA-FIP由生物素标记），进行由生物素标记的LAMP反应；同时设计1条异硫氰酸荧光素（FITC）标记的探针，与获得的LAMP产物进行特异性杂交，杂交产物经LFD完成检测。经优化，LAMP的反应条件为63℃反应40min，由LFD完成结果判读共需50min。结果表明，LAMP-LFD方法能特异性地检出哈维氏弧菌，对创伤弧菌等其他9种水产养殖重要病原菌的检测结果呈阴性。利用该方法，针对细菌纯培养物的检测灵敏度为1.0×102CFU/mL或2CFU/反应，针对污染有该菌的大黄鱼组织的检测灵敏度为5×102CFU/mL或20CFU/反应，均是以LAMP外引物vhhA-F3/vhhA-B3的常规PCR方法的100倍。因此，该方法能够快速、准确地检出哈维氏弧菌，有望在海水养殖过程哈维氏弧菌的监测和即时检测中普及使用。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈炯	宁波大学生物与海洋科学系	100	594	13.0	18.0
2	周前进	宁波大学生物与海洋科学系	14	95	6.0	9.0
3	柴方超	宁波大学生物与海洋科学系	3	18	3.0	3.0
4	蔡怡	宁波大学生物与海洋科学系	4	23	3.0	4.0
5	程蝶	宁波大学生物与海洋科学系	1	10	1.0	1.0