含不同个数基序肽聚糖锚钩蛋白与纳米抗体融合表达对GEM颗粒结合活性的比较

• 作者: 乔绪稳 侯继波 孙卫东 张元鹏 李图帅 汪浩 郑其升 陈瑾
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 生物学
• 关键词: 乳酸乳球菌 锚钩蛋白 原核表达 GEM颗粒 结合活性
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: Q936
• 字数: 4644字
• 语种: 中文

摘要

比较3种含不同个数基序肽聚糖锚钩蛋白(protein anchor,PA)的结合活性.首先应用PCR技术分别扩增得到含有1个、2个和3个自溶素基序(Lysin Motif,LysM)基因片段的PA、PA2与PA3;然后应用含纳米抗体(nanobody,Nb)基因的重组质粒pET-28a(+)-Nb构建原核表达载体,将其转化大肠杆菌BL-21 (DE3),进行诱导表达,获得目的蛋白;最后将可溶性的PA-Nb、PA2-Nb、PA3-Nb融合蛋白与GEM(Gram-positive enhancer matrix)颗粒结合,经Westem blot与SDS-PAGE进行结合鉴定与结合活性比较分析.试验结果显示裂解后可溶性的融合蛋白PA-Nb、PA2-Nb、PA3-Nb都能与GEM颗粒结合,PA2-Nb与GEM颗粒的结合活性明显好于PA-Nb,PA2-Nb的表达量和可溶性明显优于PA3-Nb,PA2-Nb与GEM颗粒的结合活性与PA3-Nb相当.本研究可为进一步完善乳球菌外壳-蛋白锚钩展示系统提供理论依据.