乳酸片球菌素PA-1在大肠杆菌中的表达与纯化

• 作者: 何荣 吴学友 袁建 都立辉 陈信全 鞠兴荣
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 工学
• 关键词: 细菌素 乳酸片球菌素 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 97-102
• 页数: 6页
• 分类号: TS201.2
• 字数: 4629字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201603019

摘要

为了实现该细菌素的外源表达,本实验首先利用聚合酶链式反应从乳酸片球菌PAF中扩增出乳酸片球菌素PA-1的结构和免疫基因,然后克隆到表达载体pGEX-6p-1,构建了N端含有GST-His-DDDDK标签的重组质粒pGEX/his-pedAB,然后转化进入大肠杆菌Rosetta (DE3)感受态细胞,经异丙基硫代半乳糖苷诱导,重组乳酸片球菌素PA-1在大肠杆菌胞内成功表达.表达的融合蛋白先经过镍亲合层析柱纯化,然后注入谷胱甘肽S-转移酶亲和色谱柱用肠激酶处理,释放出成熟的乳酸片球菌素PA-1.利用高效液相色谱和质谱技术检测乳酸片球菌素PA-1纯度.以单核细胞增生李斯特氏菌CMCC54004为指示菌,利用琼脂扩散法检验乳酸片球菌素PA-1活性.结果表明,携带GST-His-DDDDK标签的融合蛋白无活性,标签切除后其抑菌活性恢复,且其纯度达90％以上.