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西瓜抗枯萎病相关基因ClMYB转录因子的克隆及表达分析
西瓜抗枯萎病相关基因ClMYB转录因子的克隆及表达分析
作者:
吕桂云
王丽霞
韩金桓
高洪波
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
西瓜
枯萎病
ClMYB转录因子
基因克隆
表达分析
摘要:
【目的】克隆西瓜抗枯萎病相关基因 ClMYB转录因子,进行生物信息学及表达模式分析,为进一步解析ClMYB在西瓜抗枯萎病机制中的作用提供理论依据。【方法】根据西瓜与枯萎病菌不亲和互作的抑制差减文库和Microarray数据分析,获得与西瓜抗枯萎病相关的基因ClMYB,采用RT-PCR技术分离克隆ClMYBcDNA全长序列;应用生物信息学方法分析该基因的保守结构域及序列特征;使用MEGA5.0对ClMYB蛋白序列及其同源序列进行多序列比对,并构建同源物种间系统进化树;采用GFP标记的方法进行亚细胞定位,分析编码蛋白表达位置;将该基因片段通过Nde I和Xba I双酶切连接至原核表达载体pCzn1,重组质粒转化至大肠杆菌Arctic Express,经终浓度为0.5 mmol·L-1IPTG诱导4 h,用SDS-PAGE分析融合蛋白的表达;利用实时荧光定量PCR方法检测目的基因在西瓜与枯萎病菌互作中及在茉莉酸(jasmonate,JA)诱导下的表达情况。【结果】利用RT-PCR方法从西瓜野生材料PI296341-FR根系组织中克隆该基因片段(GenBank:KT751229),序列比对及生物信息学分析表明,其基因编码的氨基酸序列具有MYB转录因子R2R3型的典型特征,其N端具有R2、R3两个MYB结构域,C端高度变异。多序列比对及进化树分析表明,该基因编码的蛋白与甜瓜MYB(GenBank:XM_008440304)和黄瓜MYB(GenBank:XM_011652633)同源性最高,其编码的氨基酸一致性达到86%,这与它们同属葫芦科植物有关;亚细胞定位显示ClMYB定位于细胞核,为典型的转录因子;成功构建了该基因的原核表达载体pCzn1-ClMYB,转化至大肠杆菌得到36 kD左右蛋白;ClMYB受枯萎病菌诱导,在高抗枯萎病菌材料PI296341-FR中,相对感病品种表达量高峰出现的早,且表达量高。50μmol·L-1的MeJA处理可以显著提高感病材料Black diamond对枯萎病的抗病水平,同时诱导ClMYB表达,与抗病材料PI296341-FR相比表达趋势一致,但表达量更高。【结论】ClMYB为典型的R2R3-MYB转录因子,亚细胞定位于细胞核中;基因的原核表达得到36 kD的融合蛋白,在西瓜中的表达受枯萎病菌和茉莉酸诱导,推测ClMYB可能参与JA介导的西瓜抗枯萎病防卫反应的信号通路,在西瓜抗病中起一定的作用。
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激素诱导
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内容分析
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文献信息
篇名
西瓜抗枯萎病相关基因ClMYB转录因子的克隆及表达分析
来源期刊
中国农业科学
学科
关键词
西瓜
枯萎病
ClMYB转录因子
基因克隆
表达分析
年,卷(期)
2016,(17)
所属期刊栏目
植物保护
研究方向
页码范围
3358-3368
页数
11页
分类号
字数
语种
中文
DOI
10.3864/j.issn.0578-1752.2016.17.010
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
王丽霞
河北农业大学园艺学院
20
101
6.0
8.0
2
高洪波
河北农业大学园艺学院
76
852
16.0
26.0
3
吕桂云
河北农业大学园艺学院
39
663
14.0
25.0
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韩金桓
河北农业大学园艺学院
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引证文献(3)
二级引证文献(0)
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节点文献
西瓜
枯萎病
ClMYB转录因子
基因克隆
表达分析
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国农业科学
主办单位:
中国农业科学院
出版周期:
半月刊
ISSN:
0578-1752
CN:
11-1328/S
开本:
大16开
出版地:
北京中关村南大街12号
邮发代号:
2-138
创刊时间:
1960
语种:
chi
出版文献量(篇)
9193
总下载数(次)
12
总被引数(次)
254208
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:
the National Natural Science Foundation of China
官方网址:
http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:
青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:
数理科学
河北省自然科学基金
英文译名:
官方网址:
项目类型:
学科类型:
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