SD胚鼠心脏成纤维细胞的原代培养及鉴定

• 作者: 冯怡 唐俊明 张焕鑫 张蕾 李兴元 杨建业 沈俊 王家宁 薛仕珍 袁平 赵继先
• 来源期刊: 中国循证心血管医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 心脏成纤维细胞 原代培养 胚鼠 鉴定
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 1441-1444
• 页数: 4页
• 分类号: R322.1
• 字数: 3757字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-4055.2016.12.08

摘要

目的：建立适用于胚胎大鼠心脏成纤维细胞体外分离、培养及鉴定的技术方法。方法从SD孕19 d大鼠子宫中分离出胚胎鼠，再从胎鼠中分离出心脏，将心脏剪成肉糜状，用胰蛋白酶加上Ⅱ型、Ⅳ胶原酶联合消化法分离心脏成纤维细胞，再通过差速贴壁分离法分别收集、培养胚胎大鼠心脏成纤维细胞。在光学显微镜下观察心脏成纤维细胞形态特征的变化，用第2代心脏成纤维细胞用波形蛋白（vimentin）、结蛋白（desmin）、血管性血友病因子（vWF）、平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光鉴定。结果差速贴壁法分离的心脏成纤维细胞原代培养120 min已经完全贴壁，培养第3~5代细胞生长良好，24 h心脏成纤维细胞波形蛋白免疫荧光鉴定纯度高达97%，培养2~3 d时心脏成纤维细胞增殖活力最强。结论差速贴壁分离法结合免疫荧光鉴定可分离胚胎大鼠心脏成纤维细胞，此种方法可得到产量大，纯度高，活力好的心脏成纤维细胞，适用于细胞水平上的心血管疾病发病机制的研究。