叶酸靶向共载TFPI-2及顺铂磁性纳米复合物的制备及其对鼻咽癌HNE-1细胞的靶向性和体外抑制效应

• 作者: 刘日钊 刘涛 张娟 张黎明 符小艺 谢民强
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 关键词: 叶酸 分子靶向治疗 鼻咽肿瘤 纳米复合物 基因治疗
• 年，卷（期）: 2016,（25）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2023-2030
• 页数: 8页
• 字数: 7364字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2016.25.014

摘要

目的 制备叶酸靶向共载组织因子途径抑制物2(TFPI-2)及顺铂磁性纳米复合物,探讨其对鼻咽癌HNE-1细胞的靶向性和体外抑制效应.方法 通过酰胺化反应合成叶酸靶向高聚物叶酸-聚乙二醇-聚乙烯亚胺(FA-PEG-PEI),采用静电吸附技术,将其与本课题组前期制备的载顺铂磁纳米粒(MNP-CDDP)及TFPI-2质粒混合,得到终产物FA-PEG-PEI/MNP-CDDP/TFPI-2.核磁氢谱验证高分子聚合物的合成.动态光散射(DLS)及透射电镜(TEM)观测其粒径、电荷及形态.邻二氮菲法及邻苯二胺法测定纳米复合物中铁及顺铂(CDDP)的含量.琼脂糖凝胶电泳分析载体FA-PEG-PEI/MNP-CDDP与TFPI-2质粒的结合情况.普鲁士蓝铁染色法及荧光显微镜观察磁性纳米复合物对鼻咽癌(NPC)细胞的分子靶向性.Western印迹检测磁性纳米复合物转染HNE-1细胞后TFPI-2蛋白的表达情况.Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞计数试剂盒、流式细胞技术检测复合物对HNE-1细胞增殖、凋亡的影响.结果 核磁氢谱在FA、PEG和PEI相应的频率上可见特征吸收峰.DLS测得产物FA-PEG-PEI/MNP-CDDP/TFPI-2复合物平均粒径为141.1 nm,平均电荷为21.5 mV.透射电镜下可见纳米微粒有良好的分散性,但粒径大小不太均匀.铁含量与顺铂载药量分别为116.2 μg/ml及92.88μg/ml.琼脂糖凝胶电泳显示,当载体FA-PEG-PEI/MNP-CDDP与TFPI-2质粒质量比≥1时,载体能完全吸附质粒,并且有效保护质粒免受DNA酶的消化作用.铁染色和荧光显微镜观测可见叶酸受体(FR)阳性HNE-1细胞内蓝染磁颗粒及绿色荧光点比FR阴性CNE-2细胞显著增多(P＜0.05).HNE-1细胞被载TFPI-2质粒的复合物转染后,TFPI-2蛋白的表达量比空白载体组及单纯质粒组明显增高(P＜0.05).复合物对HNE-1细胞有明显的体外抑制效应,抑制率及凋亡率分别为64.00％及49.61％,明显高于载体组(8.19％,9.26％)、单载质粒组(40.35％,19.85％)、单载顺铂组(56.15％,36.46％),均P＜0.05.结论 采用酰胺化反应和静电吸附技术成功合成了FA-PEG-PEI/MNP-CDDP/TFPI-2磁性纳米复合物,该复合物对鼻咽癌HNE-1细胞具有良好的靶向性及体外抑制效应.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谢民强	南方医科大学珠江医院耳鼻喉科	47	214	9.0	11.0
2	张黎明	中山大学化学与化学工程学院	75	809	17.0	24.0
3	符小艺	华南理工大学材料学院	9	36	3.0	6.0
4	张娟	南方医科大学珠江医院耳鼻喉科	12	123	7.0	11.0
5	刘涛	南方医科大学珠江医院耳鼻喉科	5	17	2.0	4.0
6	刘日钊	南方医科大学珠江医院耳鼻喉科	2	12	2.0	2.0