BGC-823人胃癌细胞株SOX2基因的甲基化状态及其去甲基化的意义

• 作者: 刘刚 李庚鹏 罗琪 蔡桦立 魏斌 黄正接 黄河庆
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 关键词: 胃肿瘤 SOX2启动子 5-氮杂-2'-脱氧胞嘧啶 去甲基化
• 年，卷（期）: 2016,（32）
• 所属期刊栏目: 胃肿瘤
• 页码范围: 2548-2553
• 页数: 6页
• 字数: 4304字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0376-2491.2016.32.007

摘要

目的 观察BGC-823人胃癌细胞株中性别决定相关基因簇2(SOX2)启动子的甲基化状态,探讨SOX2基因去甲基化后对BGC-823细胞的生长和侵袭能力的影响.方法 通过甲基化特异性PCR法(MSP)检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞嘧啶(5-Aza-CdR)对BGC-823细胞SOX2启动子甲基化状态的影响,实时荧光定量PER及蛋白印迹法检测经不同浓度5-Aza-CdR作用前后BGC-823细胞中SOX2的表达情况,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测存活率,Transwell小室法和划痕实验检测侵袭及转移能力变化.建立裸鼠BGC-823胃癌移植瘤模型,40只移植瘤小鼠平均分为2组,腹腔分别注射磷酸缓冲液(PBS)、5-Aza-CdR,通过免疫组化、蛋白质印迹法检测5-Aza-CdR的抑瘤效果.结果 5-Aza-CdR逆转了BGC-823细胞SOX2的甲基化状态,SOX2 mRNA表达恢复,且恢复表达程度与5-Aza-CdR药物浓度呈正比.BGC-823细胞SOX2 mRNA和蛋白的相对表达量低于正常胃黏膜GES-1细胞[(22.80 ±0.36)和(0.49±0.01)比(20.36±0.45)和(0.91±0.28),均P＜0.05],经系列浓度(0、1、10 μmol/L) 5-Aza-CdR处理后BGC-823细胞SOX2 mRNA和蛋白的相对表达量相比差异均有统计学意义[(22.99±0.42)和(0.65±0.19)比(21.78±0.41)和(0.73±0.13)比(20.51±0.47)和(0.83±0.14),均P＜0.05].经不同浓度(1、10、20umol/L)处理后,BGC-823细胞的增殖速度明显减慢,与浓度为0μmol/L的对照组比较,各处理组细胞存活率差异有统计学意义(P＜0.05),且迁移、侵袭能力减弱(均P＜0.05).裸鼠移植瘤结果显示:5-Aza-CdR组的最终肿瘤体积、最终瘤重较小[(286.6±37.5)mm3和(325.2±32.2)mg比(540.7士42.6)mm3和(694.7±36.1)mg,P＜0.05],生存期较长[(22.5±1.0)比(18.7±1.6)d,P＜0.05],SOX2蛋白表达量高[(0.96±0.25)比(0.73±0.15),P＜0.05],免疫组化评分高[(6.23±0.45)比(3.76±0.43),P＜0.05].结论 人胃癌BGC-823细胞株SOX2基因启动子处于甲基化状态,通过去甲基化作用能够恢复SOX2基因的表达,降低胃癌细胞的增殖和侵袭能力,抑制裸鼠BGC-823胃癌移植瘤的生长,为胃癌的治疗提供一种新思路.