黄酒多酚对同型半胱氨酸诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响及其机制研究

• 作者: 刘龙斌 孟立平 季政 池菊芳 许富康 郭航远
• 来源期刊: 中国全科医学
• 关键词: 多酚类 肌,平滑,血管 Pi3K/ AKT
• 年，卷（期）: 2016,（14）
• 所属期刊栏目: 论 著 Original Research
• 页码范围: 1676-1683
• 页数: 8页
• 分类号: R543.31
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-9572.2016.14.015

摘要

目的：验证黄酒多酚（ YWPC）是否具有抑制同型半胱氨酸（ Hcy）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和迁移的作用以及其产生作用的信号通路。方法采用组织贴块法培育 SD 大鼠胸主动脉 VSMCs，取第4?7代细胞用于实验。细胞分为5组，分别为对照组，Hcy 组（500μmol/ L Hcy），YWPC 1 mg/ L 组（500μmol/ L Hcy+1 mg/ L YWPC），YWPC 10 mg/ L 组（500μmol/ L Hcy +10 mg/ L YWPC），YWPC 100 mg/ L 组（500μmol/ L Hcy +100 mg/ L YWPC）。采用 MTT 法检测 VSMCs 增殖情况；细胞划痕实验和 Transwell 法检测 VSMCs 迁移和侵袭情况；Western blotting 法检测p-AKT/ AKT表达情况。为验证 YWPC 是否经 Pi3K/ AKT 通路发挥抑制 VSMCs 的增殖和迁移，分别加入LY-294002和胰岛素生长因子1（IGF-1）用来抑制和激活 Pi3K/ AKT 通路，细胞被分为 Hcy 组，YWPC 组，LY-294002+ Hcy 组，LY-294002+ YWPC 组；Hcy 组，YWPC 组，IGF-1+ Hcy 组，IGF-1+ YWPC 组，再分别采用上述方法检测VSMCs 增殖、迁移和侵袭情况。结果培养大鼠胸主动脉 VSMCs，2周左右细胞融合可以传代，经 SM-actin 细胞免疫荧光鉴定及 DAPI 核染，确定细胞纯度在99%以上。24、48 h 时，5组 OD 值比较，差异有统计学意义（ F =52.575， P =0.016；F =83.756，P =0.014）；其中 Hcy 组 OD 值高于对照组和 YWPC 组，且与 YWPC 呈剂量依赖性（ P <0.05）。24、48、72、96 h 时，5组 VSMCs 迁移面积比较，差异均有统计学意义（P <0.05）；其中 Hcy 组 VSMCs 迁移面积多于对照组（P <0.05）；YWPC 组 VSMCs 迁移面积低于 Hcy 组，且与 YWPC 呈剂量依赖性（P <0.05）。48 h 时，5组迁移细胞数比较，差异有统计学意义（ F =79.354，P =0.001）；其中 Hcy 组穿透 Transwell 膜细胞数高于对照组（P <0.05）；YWPC 组穿透 Transwell 膜细胞数低于 Hcy 组，且与 YWPC 呈剂量依赖性（P <0.05）。5组p-AKT/ AKT比较，差异有统计学意义（ F =56.723，P =0.002）；其中 Hcy 组 p-AKT/ AKT 高于对照组（ P <0.05）；YWPC 组p-AKT/ AKT低于 Hcy 组，且与 YWPC 呈剂量依赖性（P <0.05）。加入LY-294002：24 h 时，各组 OD 值、VSMCs 迁移面积比较，差异有统计学意义（ F =46.875，P =0.004；F =67.723，P =0.002）；其中LY-294002+ Hcy 组 OD 值、VSMCs 迁移面积低于 Hcy 组（P <0.05）；LY-294002+ Hcy 组与LY-294002+ YWPC 组 OD 值、VSMCs 迁移面积比较，差异无统计学意义（P >0.05）。48 h 时，各组 VSMCs 穿透 Transwell 膜细胞数、p-AKT/ AKT比较，差异有统计学意义（F =52.904，P =0.003；F =87.904，P =0.001）；其中 LY-294002+ Hcy 组 VSMCs 穿透 Transwell 膜细胞数、p-AKT/ AKT低于 Hcy 组（ P <0.05）；LY-294002+ Hcy 组与LY-294002+ YWPC 组 VSMCs 穿透 Transwell 膜细胞数、p-AKT/ AKT比较，差异无统计学意义（P >0.05）。加入IGF-1：24 h 时，各组 OD 值、VSMCs 迁移面积比较，差异有统计学意义（ F =48.052，P =0.007；F =63.085，P =0.002）；其中IGF-1+ YWPC 组 OD 值、VSMCs 迁移面积高于YWPC 组（P <0.05）；IGF-1+ Hcy 组与IGF-1+ YWPC 组 OD 值、VSMCs 迁移面积比较，差异无统计学意义（ P >0.05）。48 h 时，各组 VSMCs 穿透 Transwell 膜细胞数、p-AKT/ AKT比较，差异有统计学意义（F =55.941，P =0.008；F =65.011，P =0.005）；其中IGF-1+ YWPC 组 VSMCs 穿透 Transwell 膜细胞数、p-AKT/ AKT高于 YWPC 组（ P <0.05）；IGF-1+ Hcy 组与IGF-1+ YWPC 组 VSMCs 穿透 Transwell 膜细胞数、p-AKT/ AKT比较，差异无统计学意义（P >0.05）。结论 YWPC 通过抑制 Pi3K/ AKT 信号通路抑制 Hcy 诱导的 VSMCs 增殖和迁移。