乙二胺四乙酸二酐对草酸脱羧酶的修饰改性

• 作者: 巫佳 杨颖 林日辉 蔡杏华 贺俊斌 陈盛峰 龙寒
• 来源期刊: 化工学报
• 关键词: 泌尿系结石 酶 草酸脱羧酶 纯化 乙二胺四乙酸二酐 化学修饰 吸附
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 生物化学工程与技术
• 页码范围: 4389-4398
• 页数: 10页
• 分类号: Q814|TQ033
• 语种: 中文
• DOI: 10.11949/j.issn.0438-1157.20160355

摘要

为提高草酸脱羧酶（Oxdc）在预防治疗泌尿系结石症方面的稳定性和应用性能，采用乙二胺四乙酸二酐（EDTAD）对Oxdc进行化学修饰，并初步优化了修饰条件：当修饰反应时间为8 h、EDTAD/Oxdc的摩尔比为50：1、反应 pH 为7.0、反应温度为37℃时，修饰率为71.91%，酶活回收率为75.42%。聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和超高效液相色谱-质谱（UPLC-MS）联用分析证明Oxdc和EDTAD共价结合成功。紫外-可见吸收光谱（UV）和圆二色性光谱（CD）分析结果表明，修饰后Oxdc的空间结构发生了一定程度的改变。同时，部分酶学性质研究表明，经EDTAD修饰后的Oxdc较游离的Oxdc，最适pH向碱性方向偏移了约1.5个单位，耐热性和耐胰蛋白酶酶解的能力均显著增强。此外，修饰后的 Oxdc 在草酸钙上的吸附量明显提高。结果说明修饰后的Oxdc的稳定性显著增强，应用性能有所改善。