研究了料液比(v/v)、pH、时间及处理次数对猴头菇多糖粗提液壳聚糖法脱蛋白的影响,得到了壳聚糖法脱蛋白的最优工艺,并通过柱层析对猴头菇多糖进行了分离纯化.优化的壳聚糖法脱蛋白工艺为:料液比50∶1,pH为粗提液本身的pH,4℃条件下静置2h,处理次数为1次;此时蛋白质去除率为60.11%±0.47%,多糖损失率为11.16%±0.48%,壳聚糖残留率为1.01%±0.005%,蛋白质去除率比Sevage法提高11.67%,且多糖损失率降低了80.87%.猴头菇粗多糖经DEAE Sepharose Fast Flow柱层析分离得到两种多糖HEP-Ⅰ和HEP-Ⅱ,Sephadex G-75柱层析、紫外检测得出HEP-Ⅰ和HEP-Ⅱ均为成分均一的多糖,红外检测得出HEP-Ⅰ为同时合有吡喃环和呋喃环的糖类物质,而HEP-Ⅱ为含有吡喃环的糖类物质.壳聚糖法脱蛋白工艺合理可行,分离纯化后的猴头菇多糖成分均一.