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长链非编码 RNA Linc00461干扰慢病毒的构建与鉴定
长链非编码 RNA Linc00461干扰慢病毒的构建与鉴定
作者:
孙笑笑
张彦
王科
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
RNA,小分子干扰
乳腺肿瘤
慢病毒属
摘要:
目的:制备 shRNA 干扰人长链非编码 RNA Linc00461的慢病毒载体(shRNA-Linc00461),为进一步深入研究长链非编码 RNA 的功能奠定基础。方法利用在线干扰设计网页进行干扰引物设计,根据小干扰 RNA 的设计原则,选取三对针对Linc00461特异性干扰引物送公司合成。合成的片段连接到慢病毒载体质粒 pSIH1-H1,形成 pSIH1-H1-shRNA-Linc00461质粒。用 PCR 及测序对其进行鉴定,之后与慢病毒包装质粒混匀,由脂质体转染至 HEK293T 细胞进行包装,产生慢病毒 shR-NA-Linc00461,收集上清液使其感染乳腺癌 MDA-MB-231细胞,通过 RT-PCR 鉴定重组慢病毒干扰效果。并选取干扰效果最好的 Linc00461感染 MDA-MB-231细胞,运用 MTT 和流式细胞术检测细胞增殖和周期的改变。结果 SIH1-H1-shRNA Linc00461质粒经 PCR 验证和测序后,证实其构建成功。shRNA-Linc00461在 HEK293T 细胞中重组成慢病毒,并成功感染MDA-MB-231,感染效率约为70%。shRNA-Linc00461感染乳腺癌 MDA-MB-231细胞后 Linc00461的表达下调65.32%;感染shRNA-Linc00461第3天 MTT 结果显示:实验组吸光度值(0.232±0.032)明显低于实验对照组(0.398±0.037)。流式结果提示实验组 G2M期细胞(47.55±5.063)%高于实验对照组(8.876±3.565)%。结论成功构建了 shRNA-Linc00461慢病毒载体,并能有效抑制 Linc00461表达,为深入研究人 Linc00461基因功能奠定了基础。
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文献信息
篇名
长链非编码 RNA Linc00461干扰慢病毒的构建与鉴定
来源期刊
安徽医药
学科
关键词
RNA,小分子干扰
乳腺肿瘤
慢病毒属
年,卷(期)
2016,(7)
所属期刊栏目
临床医学
研究方向
页码范围
1295-1299
页数
5页
分类号
字数
3795字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1009-6469.2016.07.021
五维指标
作者信息
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姓名
单位
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张彦
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传播情况
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二级引证文献(0)
研究主题发展历程
节点文献
RNA,小分子干扰
乳腺肿瘤
慢病毒属
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
安徽医药
主办单位:
安徽省药学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1009-6469
CN:
34-1229/R
开本:
大16开
出版地:
合肥市包河区乌鲁木齐路15号 安徽省食品药品检验研究院内食品药品检测技术大楼六楼
邮发代号:
26-175
创刊时间:
1997
语种:
chi
出版文献量(篇)
13671
总下载数(次)
19
总被引数(次)
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