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摘要:
目的:制备 shRNA 干扰人长链非编码 RNA Linc00461的慢病毒载体(shRNA-Linc00461),为进一步深入研究长链非编码 RNA 的功能奠定基础。方法利用在线干扰设计网页进行干扰引物设计,根据小干扰 RNA 的设计原则,选取三对针对Linc00461特异性干扰引物送公司合成。合成的片段连接到慢病毒载体质粒 pSIH1-H1,形成 pSIH1-H1-shRNA-Linc00461质粒。用 PCR 及测序对其进行鉴定,之后与慢病毒包装质粒混匀,由脂质体转染至 HEK293T 细胞进行包装,产生慢病毒 shR-NA-Linc00461,收集上清液使其感染乳腺癌 MDA-MB-231细胞,通过 RT-PCR 鉴定重组慢病毒干扰效果。并选取干扰效果最好的 Linc00461感染 MDA-MB-231细胞,运用 MTT 和流式细胞术检测细胞增殖和周期的改变。结果 SIH1-H1-shRNA Linc00461质粒经 PCR 验证和测序后,证实其构建成功。shRNA-Linc00461在 HEK293T 细胞中重组成慢病毒,并成功感染MDA-MB-231,感染效率约为70%。shRNA-Linc00461感染乳腺癌 MDA-MB-231细胞后 Linc00461的表达下调65.32%;感染shRNA-Linc00461第3天 MTT 结果显示:实验组吸光度值(0.232±0.032)明显低于实验对照组(0.398±0.037)。流式结果提示实验组 G2M期细胞(47.55±5.063)%高于实验对照组(8.876±3.565)%。结论成功构建了 shRNA-Linc00461慢病毒载体,并能有效抑制 Linc00461表达,为深入研究人 Linc00461基因功能奠定了基础。
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内容分析
关键词云
关键词热度
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文献信息
篇名 长链非编码 RNA Linc00461干扰慢病毒的构建与鉴定
来源期刊 安徽医药 学科
关键词 RNA,小分子干扰 乳腺肿瘤 慢病毒属
年,卷(期) 2016,(7) 所属期刊栏目 临床医学
研究方向 页码范围 1295-1299
页数 5页 分类号
字数 3795字 语种 中文
DOI 10.3969/j.issn.1009-6469.2016.07.021
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 张彦 74 756 14.0 26.0
2 王科 26 74 5.0 7.0
3 孙笑笑 1 0 0.0 0.0
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研究主题发展历程
节点文献
RNA,小分子干扰
乳腺肿瘤
慢病毒属
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安徽医药
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1009-6469
34-1229/R
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26-175
1997
chi
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