毛果杨半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3的基因克隆和原核表达分析

• 作者: 张强 撖静宜 曹山 李丽红 李慧 王莹 蒋璐瑶 要笑云 陆海
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 毛果杨 半胱氨酸蛋白酶 基因克隆 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2016,（14）
• 所属期刊栏目: 生物科学
• 页码范围: 50-55
• 分类号: Q7
• 语种: 中文

摘要

为研究毛果杨半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3的酶学特征和生理功能,本实验对PtCP3进行了基因克隆和原核表达分析.从毛果杨(Populus trichocarpa Torr.&Gray)中克隆得到半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3,将其克隆至pMD-18T载体.进一步构建原核表达载体pET30a-PtCP3,并在大肠杆菌(Escherichia coli)中成功诱导表达重组蛋白,然后通过包涵体洗涤法对目的蛋白进行纯化.测序结果表明,PtCP3基因CDS序列全长1074 bp,含有木瓜蛋白酶的保守催化位点和组织蛋白酶B的保守结构域.序列分析结果显示,半胱氨酸蛋白酶基因PtCP3编码357个氨基酸,预测N-末端含有长度为27个氨基酸残基的信号肽序列,去除信号肽后蛋白酶大小为36.515 kDa,理论等电点为7.44.SDS-PAGE电泳结果显示,可以检测到大小约为42 kDa的目的条带,并可通过包涵体洗涤法在体外得到了高表达量、单一的重组蛋白PtCP3.