小立碗藓C3H基因敲除载体的构建及C3H1-nptⅡ-C3H2目的片段最佳PCR条件筛选

• 作者: 姜山 崔彩云 晏国洪
• 来源期刊: 北方园艺
• 学科: 农学
• 关键词: 小立碗藓C3H基因 基因敲除 载体构建 退火温度
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 113-118
• 分类号: S781.42
• 语种: 中文
• DOI: 10.11937/bfyy.201605031

摘要

以小立碗藓作为试材,将总长为1 981 bp的小立碗藓C3H基因分为上游片段(1 000 bp),下游片段(981 bp),并以此设计引物,得到上游臂(C3H1,735 bp)、下游臂(C3H2,700 bp).在C3H1引物设计时引入XhoI、EcoRV酶切位点到两端,C3H2设计时引入NdeI、BamHI酶切位点到两端.以小立碗藓总DNA为模板,通过PCR扩增得到C3H1和C3H2片段.将C3H1和C3 H2插入到pTN182载体中,获得敲除载体(C3H1-pTN182-C3H2质粒),通过PCR获得C3H1-nptⅡ-C3H2目的片段,并且采用单因素方法研究引物浓度与退火温度对PCR产物浓度及特异性的影响.结果表明:引物浓度为0.20 μmol/L,退火温度为58.7℃,PCR产物特异性最高且产物浓度较高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜山	贵州师范大学生命科学学院	28	131	6.0	10.0
2	晏国洪	贵州师范大学生命科学学院	3	5	1.0	2.0
3	崔彩云	贵州师范大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0