慢病毒介导干扰 LSD1基因的卵巢癌稳转细胞株的构建及鉴定

• 作者: 万晓蕾 刘秀雯 吴朝阳 李袁霞 赖文升 邵根宝 金洁
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 赖氨酸特异性去甲基化酶1 RNA干扰 人卵巢癌SKOV3细胞 稳转细胞株
• 年，卷（期）: 2016,（16）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 19-22
• 页数: 4页
• 分类号: R737.31
• 字数: 3465字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2016.16.006

摘要

目的：构建并鉴定慢病毒介导干扰赖氨酸特异性去甲基化酶1（ LSD1）基因的卵巢癌稳转细胞株，为深入研究以LSD1为靶点的表观遗传学抗肿瘤治疗奠定基础。方法扩增并抽提所需质粒，紫外分光光度计检测质粒纯度，计算A260／A280。采用Lipofectamine 2000脂质体转染法将质粒转染入人肾上皮细胞293T，取转染THM质粒后的293T细胞，在倒置荧光显微镜下观察转染情况；分别取转染目的质粒和PLKO空载体质粒后的293T细胞，收集病毒上清液，感染人卵巢癌SKOV3细胞（分别记为观察组和对照组），筛选出稳转细胞株。观察组经浓度梯度（0、1、10、100、1000 ng／mL）多西环素诱导，以及两组均经100 ng／mL多西环素诱导后，采用Western blotting法检测LSD1及其特异性反应底物H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量。结果目的质粒A260／A280在2．0左右，说明纯度较高；THM质粒转染293T细胞呈绿色荧光，为真核载体表达的绿色荧光蛋白，表明成功转染。随着多西环素浓度的升高，观察组诱导后LSD1蛋白相对表达量均逐渐降低，H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量逐渐升高，各浓度间比较有统计学差异（P均＜0．01）。观察组经100 ng／mL多西环素诱导后LSD1蛋白相对表达量均明显低于同组诱导前及对照组诱导后，H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量明显高于同组诱导前及对照组诱导后（P均＜0．01）。结论成功构建慢病毒干扰下调LSD1基因表达的卵巢癌稳转细胞株，并经不同浓度多西环素诱导鉴定；该细胞株可用于以LSD1为靶点的表观遗传学抗肿瘤治疗研究。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	金洁	江苏大学医学院	34	128	6.0	9.0
2	吴朝阳		27	111	6.0	8.0
3	邵根宝	江苏大学医学院	34	95	5.0	8.0
4	刘秀雯	江苏大学医学院	4	7	2.0	2.0
5	赖文升	江苏大学医学院	2	9	2.0	2.0
6	万晓蕾		6	22	3.0	4.0
10	李袁霞	江苏大学医学院	2	5	1.0	2.0