TurboFect介导骨形态发生蛋白2转染CHO细胞的研究

• 作者: 张德蒙 李娜 王淑君 王贝贝 白凤武 谢红国 郭昕
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形态发生蛋白2 转染 阳离子聚合物 壳聚糖 TurboFect
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1801-1806
• 分类号: Q78|R318
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2016.10.001

摘要

目的:构建真核表达载体pIRES-EGFP-BMP-2,通过TurboFect转染得到表达BMP-2蛋白的CHO细胞系.方法:利用逆转录PCR方法扩增获得人的BMP-2基因cDNA,克隆入pMD 18-T载体,经PCR、酶切和基因测序分析等方法鉴定重组质粒;将BMP-2连入pIRES-EGFP真核表达载体中,经限制性酶切和PCR扩增鉴定重组质粒.以壳聚糖和TurboFect分别作为基因载体转染CHO细胞,荧光显微镜检测分析转染结果;G418筛选富集转染阳性细胞.结果:成功的克隆得到了BMP-2基因,酶切鉴定成功构建了pIRES-EGFP-BMP-2质粒.与壳聚糖组相比,TurboFect用量为1∶1时,细胞阳性率为(31.92± 1.31)％,高于壳聚糖的细胞阳性率(6.33±1.53)％.目的基因与TurboFect比例为1∶2时转染效率为(42.90±1.10)％高于1∶1的(28.59±2.38)％和1∶3的(37.52±2.14)％.细胞密度调节到5× 103 cells/cm2阳性细胞率可达到(44.43±3.23)％.荧光检测可见荧光阳性细胞得到稳定传代.Western Blot检测可见BMP-2蛋白表达.结论:TurboFect成功的介导了pIRES-EGFP-BMP-2载体转染CHO细胞,建立了稳定表达BMP-2和EGFP的CHO细胞株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	白凤武	大连理工大学生命科学与技术学院	120	1563	21.0	33.0
2	李娜	中国科学院大连化学物理研究所	207	2106	25.0	37.0
3	王淑君	大连理工大学生命科学与技术学院	6	23	3.0	4.0
5	郭昕	中国科学院大连化学物理研究所	4	0	0.0	0.0
8	张德蒙	中国科学院大连化学物理研究所	4	17	2.0	4.0
9	王贝贝	中国科学院大连化学物理研究所	3	15	2.0	3.0
10	谢红国	中国科学院大连化学物理研究所	3	2	1.0	1.0