桃甲基化敏感扩增多态性（MSAP）技术体系的建立

• 作者: 严娟 俞明亮 沈志军 蔡志翔 马瑞娟
• 来源期刊: 江苏农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 桃 DNA甲基化 MSAP 体系优化
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 43-45
• 页数: 3页
• 分类号: S188|S662.101
• 字数: 3299字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2016.11.012

摘要

为建立适合桃的甲基化敏感扩增多态性（ methylation sensitive amplification polymorphism ，简称MSAP）反应体系，以桃PCM－1R、PCM－1G为材料，对MSAP技术中的关键因素进行优化。结果表明，500 ng基因组DNA用EcoRⅠ、HapⅡ或MspⅠ各10 U（0．5μL，2000 U／mL），37℃保温12 h，即可酶切完全；25μL选择性扩增体系中，含有2μL 10倍稀释的预扩增产物、各1μL上下游引物、2．5μL 10×Taq buffer、2．5μL dNTP mix （各0．2 mmol／L）、2．5μL 25 mmol／L MgCl2、0．25μL Taq DNA聚合酶。在该体系下选用256对引物对桃叶片进行甲基化模式分析，经筛选获得23对扩增条带清晰、重复性好的引物，PCM－1R、PCM－1G总甲基化率分别为28．0％、25．7％。