脂质体转染法与电转染法在丙型肝炎病毒RNA 转染人肝癌细胞中的应用效果比较

• 作者: 卢莎 张玲 李恋 沈晓玲 蔡敏 谭文杰 邓瑶 陶格斯
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: 丙型肝炎病毒 电穿孔 脂质体 RNA转染
• 年，卷（期）: 2016,（19）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 15-18
• 页数: 4页
• 分类号: R373.9
• 字数: 2635字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2016.19.005

摘要

目的：比较脂质体转染法与电转染法在丙型肝炎病毒（ HCV ） RNA转染人肝癌细胞中的应用效果。方法培养人肝癌细胞Huh7．5-CD81并分为A、B组及对照组。 A组采用电转染质粒pHebei（E1E2）／JFH1来源的HCV RNA；B组采用脂质体转染质粒pHebei（E1E2）／JFH1来源的HCV RNA；对照组采用脂质体转染复制缺陷质粒pJFH1／GND转录获得的HCV RNA。光学显微镜下观察各组转染后细胞形态，采用免疫荧光法（ IFA）检测三组转染效率，real-time PCR法检测三组细胞培养液上清中的HCV RNA，采用TCID50法检测A、B组细胞培养液上清中的丙型肝炎病毒（HCVcc）感染滴度。结果 A组转染使用细胞数为1×106，转染后第2天细胞损伤过半，边缘毛糙；B组转染使用细胞数为2×105，转染后第2天细胞基本无损伤。 A组转染效率为9．98％±0．83％，B组转染效率为2．58％±0．39％，两组转染效率相比，P＜0．01；对照组未检出荧光阳性细胞。 A、B组转染后细胞培养液上清中HCV RNA拷贝数均呈现先下降后升高的趋势，最终稳定于106 copies／mL。 A组转染后21 d、B组转染后31 d方能检测到HCV感染滴度，A、B组收获HCV最高感染滴度均为104 ffu／mL。结论脂质体转染和电转染两种方法均可建立嵌合HCV的人肝癌细胞培养体系，脂质体转染法对细胞的损伤较小，电转染法转染效率较高、收获HCVcc的时间较短，但两种方法收获的HCVcc感染滴度无明显差异。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈晓玲		32	93	5.0	7.0
2	李恋		11	45	5.0	6.0
3	陶格斯		17	56	5.0	6.0
5	卢莎		14	48	4.0	6.0
7	蔡敏		8	43	4.0	6.0
8	谭文杰	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	89	243	9.0	12.0
9	邓瑶	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	21	102	6.0	10.0
10	张玲	中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所	3	11	2.0	3.0