酵母双杂交技术筛选宫颈癌 HeLa 细胞cDNA 文库中 FAM92 A1-289关联蛋白

• 作者: 方娟 桂卉 沈君豪 涂汉军 郭兴荣 阮绪芝
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 生物学
• 关键词: FAM92 A1-289 酵母双杂交技术 宫颈癌 HeLa细胞 增殖细胞核抗原 内质网高尔基体中间室标记物53 BCL2相关永生基因重组人BCL2相关永生基因1 半乳糖凝集素1
• 年，卷（期）: 2016,（19）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-4
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3120字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2016.19.001

摘要

目的：应用酵母双杂交技术从宫颈癌HeLa细胞cDNA文库中筛选FAM92A1-289关联蛋白。方法构建酵母双杂交pGBKT7-FAM92A1-289诱饵载体，转化至酵母AH109感受态细胞中。利用Clontech GAL4酵母双杂交系统筛选HeLa细胞cDNA文库中与FAM92A1-289相互作用的蛋白质，用营养缺陷型培养基和X-a-Gal双重筛选实验进行筛选，对筛选结果进行生物信息学分析，对克隆重复率较高的蛋白进行回转验证，将β-半乳糖苷酶活性阳性的克隆进行测序并分析。结果成功构建酵母双杂交pGBKT7-FAM92A1-289诱饵载体，可在酵母细胞中正常表达FAM92A1-289，且对酵母细胞无毒性，不存在自激活现象。筛选出在SD／-Ade／-His／-Leu／-Trp四缺培养基及含X-a-Gal的SD／-Ade／-His／-Leu／-Trp四缺培养基上均能生长且β-半乳糖苷酶活性阳性的克隆9个。经生物信息学分析发现4种蛋白重复率较高，即增殖细胞核抗原（PCNA）、半乳糖凝集素1（Galectin-1）、内质网高尔基体中间室标记物53（ERGIC-53）、重组人BCL2相关永生基因1（BAG1），并均与FAM92A1-289存在相互作用。结论利用酵母双杂交技术在Hela细胞cDNA文库中成功筛选出与FAM92A1-289相互作用的蛋白，为进一步研究FAM92A1-289的功能提供了新线索。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	涂汉军	湖北医药学院基础医学院	15	79	5.0	8.0
2	桂卉	湖北医药学院基础医学院	3	8	1.0	2.0
3	郭兴荣	湖北医药学院基础医学院	19	25	3.0	4.0
4	方娟	湖北医药学院基础医学院	14	23	2.0	3.0
5	沈君豪	湖北医药学院基础医学院	4	8	1.0	2.0
6	阮绪芝	湖北医药学院基础医学院	14	37	4.0	5.0