慢病毒介导的HTRA1基因稳定过表达人脑血管平滑肌细胞株的建立

• 作者: 曹秉振 李传芬 王敏 王晓玲 石瑜
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 慢病毒表达载体 HTRA1 CARASIL 人脑血管平滑肌细胞
• 年，卷（期）: 2016,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 2218-2222
• 分类号: R-33|Q75|Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2016.12.005

摘要

目的:构建并包装针对HTRA1基因以及其1091T＞C突变基因(HTRA1-Mut)的过表达慢病毒载体,以及建立稳定表达HTRA1及HTRA1-Mut基因的人脑血管平滑肌细胞(HBVSMC)株.方法:采用RT-PCR方法扩增HTRA1及HTRAl-Mut基因片段并将其连接于GV287载体质粒,采用慢病毒包装三质粒系统(GV287/pHelper l.0/pHelper 2.0)转染293T细胞,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液并标定病毒滴度,慢病毒感染经培养和鉴定的HBVSMC细胞株.结果:成功构建含HTRA1及HTRAl-Mut基因的慢病毒重组载体,PCR鉴定阳性的克隆进行测序和BLAST比对分析显示与源基因序列一致,并能够有效的感染并在293T细胞中表达.表达载体包装后测定病毒滴度为:2E+8 TU/mL.过表达慢病毒感染后HBVSMC有荧光表达,并且荧光率达80％以上,细胞生长良好传后细胞几乎无死亡现象.结论:成功构建了过表达HTRA1及HTRA1-Mut基因的慢病毒表达载体,得到了较高滴度的病毒悬液,建成了稳定表达HTRA1及HTRA1-Mut基因的HBVSMC细胞株,为进一步探讨HTRA1基因及突变后细胞的功能变化提供了良好的研究工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹秉振	济南军区总医院神经内科	111	579	13.0	17.0
2	王晓玲	济南军区总医院神经内科	17	119	5.0	10.0
3	王敏	济南军区总医院神经内科	24	123	5.0	10.0
4	李传芬	济南军区总医院神经内科	13	49	5.0	6.0
5	石瑜	济南军区总医院神经内科	2	0	0.0	0.0